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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jcvstop

新虫 (初入文坛)

[求助] 人胚肾细胞293培养求助 已有2人参与

各位虫友，本人化学专业，之前没有培养过动物细胞，现在在培养人胚肾细胞293上给卡死了，希望大家能帮助一下，实在不知道怎样进行下去了。
       这半个月由于论文需要，想培养人胚肾细胞293做金属形态学代谢研究，培养之前看了很多关于这种细胞的培养条件和方法，在论坛里也看了很多帖子，很多人说293细胞很容易培养，6-8小时就贴壁，并且确实有很多文献也指出了。但同时论坛里还有另外一半人指出了293细胞的贴壁性很差，细胞很娇贵，所以很难养，现在我也出现了同样的问题，细胞到目前4天了还是悬浮圆形的，极少数贴壁，并且细胞液久了就会也絮状物质产生，但是细胞数目一直在增加。不知道是什么原因让它贴壁这么难
      下面我把培养的详细放在附件图片中和大家讲一下，希望大家能帮我出一下招，小弟很感激...
      细胞在上海某生物买的，收到货后也按步骤操作，但就是不贴壁，三天后告诉卖家还不贴壁并且是圆形，并且发了图片给他，卖家很热心告诉细胞已经死了，于是就寄给我小瓶的细胞保护液，就是图23中的状态，这次我怕是培养瓶的问题，就用了不同品牌的，结果两天后，细胞还是圆形，如下图579，但是细胞公司坚持说他们培养这种细胞6小时差不多就会贴壁了，但是就是不知道到我这里就不贴了。
       半个月过去了，我怀疑是细胞株的问题，决定换一家公司，于是就从我学校细胞库拿了一株，同时，我把我的培养基和培养瓶给了细胞库老师，他也同时分别用他的培养基和我的培养基，结果24小时候后，我在实验室培养的和这位老师培养的都没有贴壁，都呈圆形状。
      现在我两天没去换液了，不知道明天又会怎样，这样下去单纯在这个细胞培养上就出现这种问题，压力好大啊，不知道这论文要到何时去了，还望有这方面经验的虫友提供帮助，谢谢大家了...

人胚肾细胞293培养求助
1.收到细胞时图1.JPG


人胚肾细胞293培养求助-1
3.收到细胞时-图3.JPG


人胚肾细胞293培养求助-2
4.收到细胞时-图4.JPG


人胚肾细胞293培养求助-3
5.6孔板培养24小时-大部分悬浮.JPG


人胚肾细胞293培养求助-4
6.6孔板培养.JPG


人胚肾细胞293培养求助-5
7.培养瓶1培养24小时-80%贴壁.JPG


人胚肾细胞293培养求助-6
8.培养瓶.JPG


人胚肾细胞293培养求助-7
9.康宁培养瓶培养24小时-70%贴壁.JPG


人胚肾细胞293培养求助-8
10.康宁培养瓶.JPG


人胚肾细胞293培养求助-9
11.培养皿培养24小时-几乎不贴壁.JPG


人胚肾细胞293培养求助-10
IMG_1220.JPG


人胚肾细胞293培养求助-11
培养液配制.png


人胚肾细胞293培养求助-12
全部贴壁的状态.JPG


人胚肾细胞293培养求助-13
三天前用康宁培养基-出现了梭形1.JPG


人胚肾细胞293培养求助-14
三天前用康宁培养基-出现了梭形2.JPG


人胚肾细胞293培养求助-15
实验器材.png
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1楼 2014-06-21 23:50:57
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秋水素心

银虫 (小有名气)
我一直在做的是293T细胞，细胞贴壁长开后是多边形的，营养条件不还的情况下周边会有小的触角。你说培养基时间长了会出现絮状物，如果确定不是细胞团块，估计培养基污染了。
293T贴壁不是很紧，换液时要小心，此外，293T的增殖有密度依赖性，密度太低不容易长起来。
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认真过好每一天！
2楼2014-06-22 08:43:52
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
培养皿不行吧，你用培养瓶不是贴壁了吗？
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3楼2014-06-22 12:10:39
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jcvstop

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 秋水素心 at 2014-06-22 08:43:52
我一直在做的是293T细胞，细胞贴壁长开后是多边形的，营养条件不还的情况下周边会有小的触角。你说培养基时间长了会出现絮状物，如果确定不是细胞团块，估计培养基污染了。
293T贴壁不是很紧，换液时要小心，此外， ...

谢谢你的指点，我今天去看了三天前重新复活的细胞，比之前贴壁情况要好些，但是发现只要是贴壁的细胞附近会聚集很多细胞，看起来为一大块长方形的团块，不知道是什么原因，另外，我看论坛说，也有人出现我这情况，他是把只要没贴壁的细胞隔两天就换液倒掉，只剩下贴壁的，这样，一个星期那些贴壁的就会长满了，不知道行不行呢？
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4楼2014-06-22 14:22:45
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jcvstop

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-06-22 12:10:39
培养皿不行吧，你用培养瓶不是贴壁了吗？

是的，好像培养皿的从来没有出现过贴壁的，但是在康宁T25瓶中出现过，就像倒数第2张图那样，但是这贴壁数量太少了，不知道该怎样让其大量贴壁
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5楼2014-06-22 14:25:46
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jcvstop at 2014-06-22 14:25:46
是的，好像培养皿的从来没有出现过贴壁的，但是在康宁T25瓶中出现过，就像倒数第2张图那样，但是这贴壁数量太少了，不知道该怎样让其大量贴壁...

铺poly-D-Lysis，或者明胶，或者...
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6楼2014-06-22 14:48:21
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lu_lu

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1-倒掉不成梭形的细胞液 补充新的 待长满
2-加血清为20%
耐心等待吧
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7楼2014-06-23 23:10:12
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jcvstop

新虫 (初入文坛)
现在，终于明白了论坛里一半说很容易培养，一半就像我这样的死活培养不出来的，现在终于有答案了，细胞有问题，同样的培养基，同样的培养皿，今天，借了别人的一株国外买回来的，砰！6个小时就贴壁了，贴的还是那么紧，顿时我就晕了。
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8楼2014-06-24 22:27:27
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jcvstop

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jcvstop at 2014-06-24 22:27:27
现在，终于明白了论坛里一半说很容易培养，一半就像我这样的死活培养不出来的，现在终于有答案了，细胞有问题，同样的培养基，同样的培养皿，今天，借了别人的一株国外买回来的，砰！6个小时就贴壁了，贴的还是那么 ...

大家买细胞的时候注意了，真的好难折腾，论坛里出现的把本来不行的细胞养贴壁的都可能是细胞本来活性就不好了，这种细胞从我这培养3个小时就有贴壁趋势了看出，这种细胞贴壁能力很强。
人胚肾细胞293培养求助-16
培养的293t.JPG
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9楼2014-06-24 22:31:01
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aeon8868

金虫 (正式写手)
这个细胞本来就帖壁慢 还不牢固。上面的回答很给力啊，问题解决了吧？我还在养细胞，欢迎交流
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10楼2014-07-22 06:12:04
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