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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 脂质体转染失败的原因
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)

[求助] 脂质体转染失败的原因

求助，国庆期间，我于10.4和10.6日做了两批脂质体转染，用的LIPO2000，质粒为含EGFP的，结果72小时内10.4的荧光表达效率很高。可是我今天看10.6号做的转染（转染后100h）了，结果荧光表达少的可怜。可是我两次转染的条件，步骤都一样的啊，细胞也是很常见的293。请问大家觉得会是什么原因造成的两批完全不同的转染效率？还有分别配制lipo2000和质粒DNA的时候能不能吹打震荡后再室温静置？
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加油，你是最棒的！
1楼 2012-10-10 19:46:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cool-cj

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励分享和交流 2012-10-12 14:27:23
跟细胞状态也有关，转染前一天是否有传一下 对数生长期的细胞是否易转些
两个分别配的时候稍微混下没关系，我一般不会剧烈吹打，两者混在一起的时候要慢滴轻摇
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4楼2012-10-12 10:57:49
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普通回帖

diandong

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2012-10-11 16:41:56
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by diandong at 2012-10-11 16:41:56
你这时间就不一致啊。

可是有表达的话，100h照样会有很多荧光表达的啊
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加油，你是最棒的！
3楼2012-10-11 21:26:04
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cool-cj at 2012-10-12 10:57:49
跟细胞状态也有关，转染前一天是否有传一下 对数生长期的细胞是否易转些
两个分别配的时候稍微混下没关系，我一般不会剧烈吹打，两者混在一起的时候要慢滴轻摇

细胞长得好我就直接拿来转了，没有传代。只是提前一天换了无血清的培养液。。
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加油，你是最棒的！
5楼2012-10-12 12:24:11
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cool-cj

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xuanxuan2121 at 2012-10-12 12:24:11
细胞长得好我就直接拿来转了，没有传代。只是提前一天换了无血清的培养液。。...

之前细胞难道是有血清贴着长的？
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6楼2012-10-12 12:50:53
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Lipo2000最怕剧烈吹打，更不能震荡，那样脂质体全部失效了，如此一来你转染效率能高吗？
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7楼2012-10-12 16:04:55
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xuanxuan2121: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-16 12:06:46
一般来说，脂质体转染EGFP，48-72h转染效率是最高的，荧光强度会很高，下一轮你可以稍微优化一下条件再做一次看看
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8楼2012-10-12 16:08:54
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cool-cj at 2012-10-12 12:50:53
之前细胞难道是有血清贴着长的？...

是的。提前一夜换掉
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加油，你是最棒的！
9楼2012-10-16 12:02:56
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by piaoyingaza at 2012-10-12 16:04:55
Lipo2000最怕剧烈吹打，更不能震荡，那样脂质体全部失效了，如此一来你转染效率能高吗？

我是在分开配的时候吹打了下，将lipo2000和质粒混合起来后就轻轻吹打了几下，难道将质粒加入lipo2000一点都不要动？
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加油，你是最棒的！
10楼2012-10-16 12:05:17
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