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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)

[求助] 脂质体转染失败的原因

求助,国庆期间,我于10.4和10.6日做了两批脂质体转染,用的LIPO2000,质粒为含EGFP的,结果72小时内10.4的荧光表达效率很高。可是我今天看10.6号做的转染(转染后100h)了,结果荧光表达少的可怜。可是我两次转染的条件,步骤都一样的啊,细胞也是很常见的293。请问大家觉得会是什么原因造成的两批完全不同的转染效率?还有分别配制lipo2000和质粒DNA的时候能不能吹打震荡后再室温静置?
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cool-cj

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励分享和交流 2012-10-12 14:27:23
跟细胞状态也有关,转染前一天是否有传一下 对数生长期的细胞是否易转些
两个分别配的时候稍微混下没关系,我一般不会剧烈吹打,两者混在一起的时候要慢滴轻摇
4楼2012-10-12 10:57:49
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普通回帖

diandong

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2012-10-11 16:41:56
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by diandong at 2012-10-11 16:41:56
你这时间就不一致啊。

可是有表达的话,100h照样会有很多荧光表达的啊
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3楼2012-10-11 21:26:04
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cool-cj at 2012-10-12 10:57:49
跟细胞状态也有关,转染前一天是否有传一下 对数生长期的细胞是否易转些
两个分别配的时候稍微混下没关系,我一般不会剧烈吹打,两者混在一起的时候要慢滴轻摇

细胞长得好我就直接拿来转了,没有传代。只是提前一天换了无血清的培养液。。
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5楼2012-10-12 12:24:11
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cool-cj

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xuanxuan2121 at 2012-10-12 12:24:11
细胞长得好我就直接拿来转了,没有传代。只是提前一天换了无血清的培养液。。...

之前细胞难道是有血清贴着长的?
6楼2012-10-12 12:50:53
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Lipo2000最怕剧烈吹打,更不能震荡,那样脂质体全部失效了,如此一来你转染效率能高吗?
7楼2012-10-12 16:04:55
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xuanxuan2121: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-16 12:06:46
一般来说,脂质体转染EGFP,48-72h转染效率是最高的,荧光强度会很高,下一轮你可以稍微优化一下条件再做一次看看
8楼2012-10-12 16:08:54
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cool-cj at 2012-10-12 12:50:53
之前细胞难道是有血清贴着长的?...

是的。提前一夜换掉
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9楼2012-10-16 12:02:56
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xuanxuan2121

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by piaoyingaza at 2012-10-12 16:04:55
Lipo2000最怕剧烈吹打,更不能震荡,那样脂质体全部失效了,如此一来你转染效率能高吗?

我是在分开配的时候吹打了下,将lipo2000和质粒混合起来后就轻轻吹打了几下,难道将质粒加入lipo2000一点都不要动?
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10楼2012-10-16 12:05:17
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