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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

[求助] SDS-PAGE跑得很难看，请高手分析

SDS-PAGE跑得很难看，请高手分析：
10%的分离胶，4%的浓缩胶，电压：分离胶120V浓缩胶80V，缓冲液刚配的，在浓缩时没有浓缩成一条线，很粗。请高手分析！
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    • 2012-10-27 19:27:41, 46.43 K

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1楼2012-10-27 19:27:45
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流问题 2012-10-30 16:00:25
简单评价下，你可能配胶的AB出现问题了
胶没好好凝，玻璃板没好好洗干净。。。
然后就是可能你的蛋白量有点大，有的孔可能没有，你MARKER都被你挤得很丑了。。。
最大就是胶没凝好
电泳液的pH有么有调。。。
一项项来吧。。。这个东西就得认真
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-30 11:09:59
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-10-30 13:21:33
你可能配胶的AB出现问题了？？是AP?还是？？？
蛋白不大的只有30KD
...

我说的蛋白量大，不是说你的蛋白分子量大。。。
AP要是出问题了一般都不凝了。。。
你先重配个100ml的AB试试，
另外，你能把你其他的试剂啥的都保证完全正确么？
还有TRIS的pH，你都测好了么
如果你的胶孔一共10个，你只有4个样的话，加上一个marker,就是5个孔，剩下的最好用LOADING BUFFER+电泳缓冲液补充到上样体积，10个孔一起跑，就不会出现泳道不直了。。。
多试试就好了。。。呵呵
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-30 18:05:58
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