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小鼹鼠

木虫 (小有名气)

[求助] 沉淀和上清是什么意思啊?

弱弱地问一句,每次做蛋白胶的时候,要跑沉淀和上清,请问沉淀和上清分别是什么?为什么要看是在沉淀还是上清里表达?
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天道酬勤
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hippo_li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
细胞破碎后,离心分离的沉淀和上清。沉淀主要是菌体碎片和包涵体,上清主要包含细胞中的可溶性蛋白。一般来说,表达的蛋白要有活性,都是以可溶性蛋白的形式存在,在沉淀中的包涵体,是错误折叠的蛋白,没有活性。
2楼2012-10-22 20:19:39
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小鼹鼠

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hippo_li at 2012-10-22 20:19:39
细胞破碎后,离心分离的沉淀和上清。沉淀主要是菌体碎片和包涵体,上清主要包含细胞中的可溶性蛋白。一般来说,表达的蛋白要有活性,都是以可溶性蛋白的形式存在,在沉淀中的包涵体,是错误折叠的蛋白,没有活性。

谢谢!
天道酬勤
3楼2012-10-22 20:30:27
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yangqq8282

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上清是离心后上面清清的液体
4楼2012-10-22 20:36:13
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jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.有些蛋白是分泌性的,所以你离心后,蛋白在上清里。
2.大部分蛋白是非分泌性的,你离心后,但还还是在细胞里,即沉淀中。
5楼2012-10-23 10:22:27
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古月问你哦

铜虫 (小有名气)

不是啊,,沉淀是沉淀,是包涵体,但是包涵体也是可溶性的,包涵体复性得到的蛋白活性没有保证,上清一定是可溶性的,在原核表达中上清的得到的蛋白是有活性的,但是在原核表达中,很多蛋白是得不到上清的,如果上清中有很好,没有只能纯化包涵体,只是蛋白没有活性保证,有人可以接受有人不可有接受,但是上清又没有,那只能采取其他办法,比如用酵母表达或做瞬时转染表达在真核体内得到活性蛋白
我就是我,是不一样的烟火
6楼2015-10-29 11:40:50
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