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银虫 (著名写手)

[求助] 如何设计引物扩增片段?做克隆的

已知 cdna序列和cds序列。
想设计引物:pcr扩增片段---回收片段,加A---与载体连接----转化--提质粒等
请问如何设计引物?是不是还要找到cds的  起始密码  终止密码之类?
谁能详细告诉我?初学者的困惑很痛苦啊
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123n

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-01 20:02:13
review: 金币+2, 谢 2012-10-08 13:14:10
Taq酶是加A的酶,而pfu不加A!!!   设计引物其实很简单,你要是扩增基因全长的话,就把基因两端的序列完全copy下来就ok,不要少于18bp~~ 绝对能扩增出来!  想要做融合蛋白表达的话,建议 去掉ATG~~~~~
9楼2012-09-30 09:23:47
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-01 20:01:18
review: 金币+2, 谢谢! 2012-10-08 13:13:23
这个没什么特别的呀,不需要起始密码终止密码子,你的上下游引物就是起始终止的作用,你要注意的是你设计的那段扩增片段是不是特异的,就按普通pcr引物设计一样设计引物
2楼2012-09-29 15:20:05
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baby1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
review: 金币+2, 谢谢! 2012-10-08 13:13:36
学习一下那个DNAman软件,primer5等专业引物设计软件,挺好用的。
加油。
3楼2012-09-29 15:28:58
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-01 20:01:38
review: 金币+2, 谢谢! 2012-10-08 13:13:55
是用sdna序列就可以了,加A需使用还有加A酶功能的dna扩增酶,有些酶扩增出来是不加A的,另外扩增后你可以直接连接到表达载体上就不需要加A了,另外起始密码和终止密码你一般最好含在里面,因为有些载体是不含有atg启动子和终止密码子的,但大多都是含有的,你带上了也不影响,所以最好带着。
生物化学与分子生物学
4楼2012-09-29 15:49:21
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