| 查看: 2298 | 回复: 6 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
我有几个克隆和基因重组的基本问题不太清楚，请各位帮帮忙！
|
|||
|
1、DH5α和JM109这两个菌株在做克隆时有什么区别，我看的文章里，做克隆时两者都用。 2、做转化时，我看文献里都会用X-Gal和IPTG来做蓝白斑筛选，但是我们用T载连接转化到DH5α中的时候，是不用蓝白斑来筛选的，出现阳性菌落的时候就挑单菌落做菌落PCR验证，这样是不是就可以代替蓝白斑筛选了，甚至比前者更有说服力？ 3、用BL21和毕赤酵母表达时，一般用什么酶与载体连接呢？我的理解是根据设计引物时加的酶切位点来定，可不知道为什么老师还让我查。 4、做易错PCR和DNA Shuffling时怎么确定重组的条件呢？例如：PCR体系，程序，内切酶和无引物PCR的程序等等。或者摸索重组条件的时候的依据有哪些？易错PCR是将突变的碱基控制在一定的范围之内吗，那不是没摸索一次就要测一次序？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有229人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因克隆表达中信号肽的问题
已经有11人回复
- 求助-基因克隆及引物设计的问题
已经有6人回复
- 基因克隆中酶切连接问题
已经有13人回复
- 请教一个基因的扩增，TA克隆问题
已经有6人回复
- 请教各位高人，基因克隆表达的流程是什么？
已经有8人回复
- 一个关于水稻基因图位克隆的问题诚挚恳求大牛解答
已经有35人回复
- 基因克隆测序结果分析问题
已经有3人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 基因克隆问题~~
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于基因克隆写文章的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案
已经有17人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
gwd0312
木虫 (正式写手)
“无冕之王”
- MolEPI: 5
- 应助: 131 (高中生)
- 金币: 1973.2
- 红花: 10
- 帖子: 418
- 在线: 88.3小时
- 虫号: 1067565
- 注册: 2010-08-01
- 性别: GG
- 专业: 质谱分析
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-09-28 11:32:20
1949stone: MolEPI+1, ok 2012-09-28 11:32:27
1949stone: 回帖置顶 2012-09-28 11:32:20
1949stone: MolEPI+1, ok 2012-09-28 11:32:27
|
1、 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。JM109菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株。 2、严格来说，蓝白斑筛选还是要做的，筛选出白班之后再做PCR验证，这样假阳性概率就小。 3、选择酶切位点很重要，不光要切下来，下一步还要能连接上去，查阅文献是对的，好好筛选，挑选常见的，经济的，连接效率高的。 |
3楼2012-09-28 11:12:46
2楼2012-09-28 10:59:50
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2012-09-28 15:01:02
5楼2012-10-02 22:54:53
50