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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

MolEPI: 5
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专业: 质谱分析

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-09-28 11:32:20
1949stone: MolEPI+1, ok 2012-09-28 11:32:27

1、 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。JM109菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株。
2、严格来说，蓝白斑筛选还是要做的，筛选出白班之后再做PCR验证，这样假阳性概率就小。
3、选择酶切位点很重要，不光要切下来，下一步还要能连接上去，查阅文献是对的，好好筛选，挑选常见的，经济的，连接效率高的。