应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求高人指导！蛋白浓度不够怎么办？
141/2返回列表12下一页
查看: 1246  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)

[求助] 求高人指导！蛋白浓度不够怎么办？

小妹我纯化了一个约18kD的蛋白，准备用NMR解结构，浓度要求达到0.3mM才行，表达量还可以，但是在纯化中试了ph分别为8.0和6.8的buffer，溶解性均不太好，关键是浓缩以后只能到0.1mM就开始沉淀了，纠结啊纠结~~不知各位大侠能不能给点宝贵建议？谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-27 14:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

once1015

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-09-27 22:50:58
如果不是用于复合物的结构， 可以适当提高盐的浓度。
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-27 14:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-09-27 22:51:06
浓缩出现沉淀，主要还是因为PH不合适的缘故，介意根据蛋白的PI值多试几个PH梯度。同时浓缩的时候，最好补点盐，盐浓度一般要补到0.5M~1M。稍微加一点甘油，保护蛋白，不让浓缩条件太恶劣。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-27 14:46:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

once1015

木虫 (正式写手)
★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-27 22:51:17
另外需要 用DLS 看一下是否聚集，如果聚集了  你浓度高也不行吧
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-27 14:46:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-09-27 14:46:08
浓缩出现沉淀，主要还是因为PH不合适的缘故，介意根据蛋白的PI值多试几个PH梯度。同时浓缩的时候，最好补点盐，盐浓度一般要补到0.5M~1M。稍微加一点甘油，保护蛋白，不让浓缩条件太恶劣。

可是我这个要作为NMR采集谱的样品，盐浓度太高的话NMR探头会承受不了，最多承受200mM的盐浓度
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-27 15:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by once1015 at 2012-09-27 14:43:33
如果不是用于复合物的结构， 可以适当提高盐的浓度。

是在一个完整结构域后加了一段的融合蛋白，盐浓度已经达到了100mM
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-27 15:18:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by once1015 at 2012-09-27 14:46:18
另外需要 用DLS 看一下是否聚集，如果聚集了  你浓度高也不行吧

用分子筛看出来，没有聚集
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-27 15:19:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流和分享 2012-09-27 22:51:29
引用回帖:
5楼: Originally posted by 草鹿八千留 at 2012-09-27 15:17:22
可是我这个要作为NMR采集谱的样品，盐浓度太高的话NMR探头会承受不了，最多承受200mM的盐浓度...

这样的话，要么你就试几个PH。
再问下，你的蛋白有标签么？His或者GST之类的，如果有的话，可以尝试挂柱富集一下，或许就能把浓度提高上去了。
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-27 16:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)
★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-09-27 22:51:42
会不会是蛋白不是正确构象呢？
赞一下 回复此楼
静心做事。
9楼2012-09-27 20:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gelois at 2012-09-27 16:13:27
这样的话，要么你就试几个PH。
再问下，你的蛋白有标签么？His或者GST之类的，如果有的话，可以尝试挂柱富集一下，或许就能把浓度提高上去了。...

有的，是his-tag的，我在纯化的第一步就是挂Ni亲和柱富集的
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-28 09:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 草鹿八千留 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 8/400 2026-09-17 02:04 by Tql5LQhh5rLK
[博后之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-17 02:02 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-17 02:02 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 01:38 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 i3KBRD19ERkG 2026-09-16 3/150 2026-09-17 00:50 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-16 21:03 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 20:50 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:03 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 16:12 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 14:39 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 08:51 by SjQobnC04j06
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:15 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 04:51 by LH5NkK5Ud4bh
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:26 by zNcEhTcH7ihq
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:26 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭