24小时热门版块排行榜    

查看: 1041  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)

[求助] 求高人指导!蛋白浓度不够怎么办?

小妹我纯化了一个约18kD的蛋白,准备用NMR解结构,浓度要求达到0.3mM才行,表达量还可以,但是在纯化中试了ph分别为8.0和6.8的buffer,溶解性均不太好,关键是浓缩以后只能到0.1mM就开始沉淀了,纠结啊纠结~~不知各位大侠能不能给点宝贵建议?谢谢了!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流和分享 2012-09-27 22:51:29
引用回帖:
5楼: Originally posted by 草鹿八千留 at 2012-09-27 15:17:22
可是我这个要作为NMR采集谱的样品,盐浓度太高的话NMR探头会承受不了,最多承受200mM的盐浓度...

这样的话,要么你就试几个PH。
再问下,你的蛋白有标签么?His或者GST之类的,如果有的话,可以尝试挂柱富集一下,或许就能把浓度提高上去了。
8楼2012-09-27 16:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

once1015

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-09-27 22:50:58
如果不是用于复合物的结构, 可以适当提高盐的浓度。
2楼2012-09-27 14:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-09-27 22:51:06
浓缩出现沉淀,主要还是因为PH不合适的缘故,介意根据蛋白的PI值多试几个PH梯度。同时浓缩的时候,最好补点盐,盐浓度一般要补到0.5M~1M。稍微加一点甘油,保护蛋白,不让浓缩条件太恶劣。
3楼2012-09-27 14:46:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

once1015

木虫 (正式写手)

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-27 22:51:17
另外需要 用DLS 看一下是否聚集,如果聚集了  你浓度高也不行吧
4楼2012-09-27 14:46:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +4 18419759900 2026-03-25 4/200 2026-03-26 08:53 by zhyzzh
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +14 tcxiaoxx 2026-03-20 16/800 2026-03-25 23:14 by peike
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 材料学硕,求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +3 SYA! 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
信息提示
请填处理意见