应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求高人指导！蛋白浓度不够怎么办？
141/2返回列表12下一页
查看: 1163  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)

[求助] 求高人指导！蛋白浓度不够怎么办？

小妹我纯化了一个约18kD的蛋白，准备用NMR解结构，浓度要求达到0.3mM才行，表达量还可以，但是在纯化中试了ph分别为8.0和6.8的buffer，溶解性均不太好，关键是浓缩以后只能到0.1mM就开始沉淀了，纠结啊纠结~~不知各位大侠能不能给点宝贵建议？谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-27 14:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

once1015

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-09-27 22:50:58
如果不是用于复合物的结构， 可以适当提高盐的浓度。
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-27 14:43:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-09-27 22:51:06
浓缩出现沉淀，主要还是因为PH不合适的缘故，介意根据蛋白的PI值多试几个PH梯度。同时浓缩的时候，最好补点盐，盐浓度一般要补到0.5M~1M。稍微加一点甘油，保护蛋白，不让浓缩条件太恶劣。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-27 14:46:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

once1015

木虫 (正式写手)
★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-27 22:51:17
另外需要 用DLS 看一下是否聚集，如果聚集了  你浓度高也不行吧
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-27 14:46:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gelois at 2012-09-27 14:46:08
浓缩出现沉淀，主要还是因为PH不合适的缘故，介意根据蛋白的PI值多试几个PH梯度。同时浓缩的时候，最好补点盐，盐浓度一般要补到0.5M~1M。稍微加一点甘油，保护蛋白，不让浓缩条件太恶劣。

可是我这个要作为NMR采集谱的样品，盐浓度太高的话NMR探头会承受不了，最多承受200mM的盐浓度
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-27 15:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by once1015 at 2012-09-27 14:43:33
如果不是用于复合物的结构， 可以适当提高盐的浓度。

是在一个完整结构域后加了一段的融合蛋白，盐浓度已经达到了100mM
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-27 15:18:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by once1015 at 2012-09-27 14:46:18
另外需要 用DLS 看一下是否聚集，如果聚集了  你浓度高也不行吧

用分子筛看出来，没有聚集
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-27 15:19:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流和分享 2012-09-27 22:51:29
引用回帖:
5楼: Originally posted by 草鹿八千留 at 2012-09-27 15:17:22
可是我这个要作为NMR采集谱的样品，盐浓度太高的话NMR探头会承受不了，最多承受200mM的盐浓度...

这样的话，要么你就试几个PH。
再问下，你的蛋白有标签么？His或者GST之类的，如果有的话，可以尝试挂柱富集一下，或许就能把浓度提高上去了。
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-27 16:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)
★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-09-27 22:51:42
会不会是蛋白不是正确构象呢？
赞一下 回复此楼
静心做事。
9楼2012-09-27 20:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gelois at 2012-09-27 16:13:27
这样的话，要么你就试几个PH。
再问下，你的蛋白有标签么？His或者GST之类的，如果有的话，可以尝试挂柱富集一下，或许就能把浓度提高上去了。...

有的，是his-tag的，我在纯化的第一步就是挂Ni亲和柱富集的
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-28 09:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 草鹿八千留 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭