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草鹿八千留

银虫 (初入文坛)

[求助] 求高人指导!蛋白浓度不够怎么办?

小妹我纯化了一个约18kD的蛋白,准备用NMR解结构,浓度要求达到0.3mM才行,表达量还可以,但是在纯化中试了ph分别为8.0和6.8的buffer,溶解性均不太好,关键是浓缩以后只能到0.1mM就开始沉淀了,纠结啊纠结~~不知各位大侠能不能给点宝贵建议?谢谢了!
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-09-27 22:51:42
会不会是蛋白不是正确构象呢?
静心做事。
9楼2012-09-27 20:50:03
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查看全部 14 个回答

once1015

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-09-27 22:50:58
如果不是用于复合物的结构, 可以适当提高盐的浓度。
2楼2012-09-27 14:43:33
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-09-27 22:51:06
浓缩出现沉淀,主要还是因为PH不合适的缘故,介意根据蛋白的PI值多试几个PH梯度。同时浓缩的时候,最好补点盐,盐浓度一般要补到0.5M~1M。稍微加一点甘油,保护蛋白,不让浓缩条件太恶劣。
3楼2012-09-27 14:46:08
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once1015

木虫 (正式写手)

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-27 22:51:17
另外需要 用DLS 看一下是否聚集,如果聚集了  你浓度高也不行吧
4楼2012-09-27 14:46:18
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