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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 western blot 分离胶处残留条带
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zrtpaopao

金虫 (小有名气)

[求助] 求助 western blot 分离胶处残留条带

western blot实验 胶跑完后在浓缩胶处能看到一排明显的白色条带，继续转膜用丽春红染色也能染出条带但是没有以前的颜色深。我怀疑是不是胶上的蛋白没有完全跑下去剩了一部分在分离胶上？

求正解！！！
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1楼 2012-09-26 17:50:46
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zrtpaopao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-09-26 18:53:20
是没完全跑下去的蛋白，是不是上样量偏大或是膜蛋白

再弱弱的问一下 膜蛋白会跑不下去吗？
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4楼2012-09-26 19:36:19
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zrtpaopao: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-26 19:35:21
是没完全跑下去的蛋白，是不是上样量偏大或是膜蛋白
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jiayoubashaonian
2楼2012-09-26 18:53:20
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zrtpaopao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-09-26 18:53:20
是没完全跑下去的蛋白，是不是上样量偏大或是膜蛋白

每次上样量都是一样的，只是做这么长时间WB以来出现过两次这样的情况，所以是不是可以排除这两个原因。但是我把胶用考马斯亮蓝染色确实是蛋白。
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3楼2012-09-26 19:34:17
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
丁香园一位同学的解释，供参考：
“样品没有进入分离胶的原因
样品处理不好，蛋白部分发生凝集，分子量变大造成；蛋白浓度过大，堵住胶孔了；蛋白本身分子量就不适合采用这种方法。
制胶不好，尿素浓度，制胶温度，方法都很重要。温度降低，尿素浓度过大的话，由于溶解度降低，会从胶液中析出。尿素浓度过高，胶虽然凝了，但尿素没有完全均匀溶解在其中，局部过高，堵塞胶孔。”
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zrtpaopao
jiayoubashaonian
5楼2012-09-26 21:14:28
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