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淡竹2066

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化遇到问题

各位虫友,大家好!我最近在做可溶性蛋白的诱导表达,好不容易表达出来,但是纯化的时候没摸好条件,洗脱时没有把杂蛋白去除干净,我还能再将洗脱下来的蛋白重新上柱再洗脱一次吗?
为我用的宿主菌是革兰氏阳性菌,每次超声破碎都很麻烦,要好几个小时,而且我的要求不高,只要能纯化到我的目的蛋白就行。
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ypan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的是什么标签,His还是GST?
一般这两种比较常用,多采用亲和层析的方法。
在之前一般是要用超声波破碎的方法破碎细胞。
我之前是用His标签的,用的是Novagen公司的亲和层析镍柱分离目的蛋白,当然这是5年前的事情了。
现在蛋白纯化的产品很多。可以找找GE、Qiagen、MN等。
10楼2012-09-24 13:30:49
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Jorming033

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
淡竹2066: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-25 16:45:17
电泳之后蛋白一般都已经变性了,不能在层析。但你如果用原始混有杂蛋白的原溶液是可以再次层析纯化的。
论文命运真多折,希望是好事多磨,祈求好运
2楼2012-09-23 09:16:36
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水凝胶

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-24 10:24:22
淡竹2066: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-25 16:45:31
可以,我们实验室的可溶性蛋白是过两次柱子,凝胶柱和金属亲和柱,你可以尝试用不同的柱子。你的蛋白好杂最好在上样处理一下,比如说盐析之类的,
3楼2012-09-23 10:05:02
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小神龙198901

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
淡竹2066: 金币+1, 有帮助 2012-09-25 16:45:48
可以的,或者你也可以再跑下非变性电泳,应该也是没问题的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
加油你能行
4楼2012-09-23 10:42:08
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