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SYBR荧光定量扩增曲线异常
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| 扩增曲线从左到右浓度依次降低，5倍稀释，熔解曲线中，有2个峰的是浓度最高的，请问，浓度最高的怎么跑成这样？ |
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2012-09-14 20:05:10, 1.29 M
2012-09-14 20:07:14, 1.07 M
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atlanticwi
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2楼2012-09-15 11:02:40
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 很久没来了，辛苦 2012-09-17 16:44:39
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 很久没来了，辛苦 2012-09-17 16:44:39
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嗯................ 补救有几个方法： 1. 重新提，并注意洗涤步骤，乙醇洗两次左右。如果是RNA的话，分光光度测量时注意260/230比值，不要低于1，低于1的话，盐类杂质太多肯定是干扰PCR进程的。 2. 做标曲好像是可以把头尾的误差较大的点去掉的，多做几个梯度，以6~7个为宜，若除去原液的其他稀释样品都能成线性，且斜率接近-3.32，就不要原液这个点了，用之后的6个点做标曲，但注意，若中间有点误差太大的话是不能去掉的。必须重做。同时你最后待测样品也一定要落在除掉原点后的6个点的线性范围内。 个人看法 若有说错请高手指点 |
4楼2012-09-16 12:36:55
