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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖跑胶求助
汕头大学海洋科学接受调剂
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mao19881205

金虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖跑胶求助

我刚开始做琼脂糖电泳，出现了这个问题，请大家指教。图片是单个基因DAN的条带。前面都应该没有条带，是对照。最后三个应该有。但出现了拖尾现象，看不清楚了。不能判断对照有没有条带。请问这是什么原因导致的？

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1楼 2012-09-11 19:32:45
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mao19881205: 金币+2, ★有帮助 2012-09-12 08:02:11
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-12 16:07:48
个人觉得你的胶没做好，你看你的Maker都拖成那样！建议楼主重做下。
  做的时候琼脂糖一定要完全溶解，在液体中看不到油状物，但注意别容得太久。还不行电泳液也换下，电压调低跑得时间长点。
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
2楼2012-09-11 20:59:49
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水月寺学徒

金虫 (小有名气)

江湖浪子，行游诗人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mao19881205: 金币+1, ★有帮助 2012-09-12 08:02:29
配胶是不是用的水哦？要用1X的TAE
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活出生而为龙的狷狂
3楼2012-09-11 21:44:34
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小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mao19881205: 金币+2, ★有帮助 2012-09-12 08:03:19
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-12 16:07:59
1.maker没有跑好，原因如同楼上，制胶存在问题，0.5×TBE也可以。
2.建议刚开始上样孔不要太多，否则弥散后条带不清楚。
3.拖尾现象为非特异扩增，适当提高退火温度。
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生活是一面镜子，要笑着面对！
4楼2012-09-12 00:17:47
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mao19881205: 金币+2, ★有帮助 2012-09-12 08:04:09
我觉得有可能是胶未完全冷却凝结，我有几次就是着急 ，结果和LZ的差不多。另外胶浓度和跑胶电压注意选择，短的DNA尽量选择浓度大的胶，长的可以稀一点，0.8%即可，长度相近的条带需要大浓度胶和低电压，希望对LZ有所帮助
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5楼2012-09-12 00:31:14
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qiuqu_200212

至尊木虫 (知名作家)

无助又无奈

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶做得不好，没有溶解均匀，未冷却就倒胶。造成人为的弥散形式。
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无奈又无助的天鹅，孤零零
6楼2012-09-12 08:06:53
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mao19881205

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小小技术官 at 2012-09-12 00:17:47
1.maker没有跑好，原因如同楼上，制胶存在问题，0.5×TBE也可以。
2.建议刚开始上样孔不要太多，否则弥散后条带不清楚。
3.拖尾现象为非特异扩增，适当提高退火温度。

mark开始的浓度有点高了，已经调整，没问题了。但之前我做过一批，也没有出现拖尾现象。但后面两次都有这种拖尾现象
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7楼2012-09-12 08:06:58
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baby1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mao19881205: 金币+1 2012-09-14 21:49:40
我觉得是电压太大了，marker都跑歪了，胶应该没问题吧。
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加油。
8楼2012-09-12 15:14:47
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by qiuqu_200212 at 2012-09-12 08:06:53
胶做得不好，没有溶解均匀，未冷却就倒胶。造成人为的弥散形式。

未冷却就倒胶会造成人为的弥散形式吗？

以前真不知道这个。
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9楼2012-09-12 16:44:49
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王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你做过的那批是不是和这次是一样的基因，引物，条件，一样的体系？如果都一样的话还跑成这样，很可能是你的胶出现了问题，像楼上说的，是用TAE配胶，跑胶时电压调低点，TAE最好也新配。祝实验顺利
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10楼2012-09-12 16:58:08
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