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[交流]
提RNA提伤了
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提RNA都快成提RNA工人了，提的次数那是个多啊，可是都要提提伤了，为什么老降解，怎么提都降解，到底是怎么回事，如果说夏天是因为天气热，这个天气怎么也会降解，是个什么情况？我把洗涤RNA的乙醇第一次配成70%，第二次配成73%左右了，不知道脑子怎么了，可能是抽了，老是配错。不知道这些有没有影响。这是我这两天提的RNA图，请大家看看我能不能往下做RACE，我实在没办法了，不知道 到底是个什么原因。今天测了下第一次提的OD值，两个OD260/280和浓度分别是：1.99，785.7ng/ul;2.02,1314ng/ul.我觉得值还是蛮好的。我检测RNA的时候上样量是2ul。用的是普通的检测DNA的器皿，不过新换的电泳缓冲液。  2012-9-5-4.jpg  2012-9-6-2.jpg [ Last edited by yananhl on 2012-9-7 at 10:44 ] |
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yananhl: 金币+1, 恩，好。可能导致这种现象的原因很多吧，就是不知道哪步的原因。 2012-09-06 09:57:33
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-09-06 13:55:59
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yananhl: 金币+1, 恩，好。可能导致这种现象的原因很多吧，就是不知道哪步的原因。 2012-09-06 09:57:33
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-09-06 13:55:59
| 研究生期间也提了几百个，但是是植物RNA。当时用的管以及枪头都是Axygen的RNase free产品，试剂为TaKaRa的RNAiso，其余仪器以及试剂都是自己处理的。提取这么多次，绝大部分质量不错（电泳结合分光光度计测定OD260/OD280），个人感觉环境和操作都很重要。提RNA最好有个独立的实验室，是在没条件，最好有块独立的RNA操作区；在操作上，操作者的手套口罩等以及实验每步都要考虑如何操作能降低降解的几率。 |
12楼2012-09-05 20:40:25
★ ★ ★ ★ ★
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yananhl: 金币+1, 谢谢 2012-09-06 09:56:31
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yananhl: 金币+1, 谢谢 2012-09-06 09:56:31
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-09-06 13:56:14
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之前提过好多次RNA 人的肝癌组织的，每次的质量都挺好的，说说我的方法，首先要确保所用的移液器和枪头是RNase-free的 最好买进口的，提组织的时候研磨用的研钵和研钵棒要用DEPC水浸泡24h然后高压灭菌，最后烘干，烘干的过程中要用锡箔纸包封好。在研磨前最好把研钵和钵棒放在冰箱中预冷。磨组织的时候要在冰上，并且研钵中要加入trizol和液氮，磨的时候要快。另外就是要戴好手套和口罩。还要注意不要让大家在你身边来回走动，在实验过程中尽量不要对着试验台说话，提RNA的试验台要远离提质粒的试验台。我觉得这些都注意了应该就不会有什么问题了，希望对LZ会有帮助。 [ Last edited by angel_yy on 2012-9-5 at 20:56 ] |
13楼2012-09-05 20:54:46
18楼2012-09-06 13:42:57
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