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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提RNA提伤了
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yananhl

银虫 (小有名气)

[交流] 提RNA提伤了

提RNA都快成提RNA工人了，提的次数那是个多啊，可是都要提提伤了，为什么老降解，怎么提都降解，到底是怎么回事，如果说夏天是因为天气热，这个天气怎么也会降解，是个什么情况？我把洗涤RNA的乙醇第一次配成70%，第二次配成73%左右了，不知道脑子怎么了，可能是抽了，老是配错。不知道这些有没有影响。这是我这两天提的RNA图，请大家看看我能不能往下做RACE，我实在没办法了，不知道
到底是个什么原因。今天测了下第一次提的OD值，两个OD260/280和浓度分别是：1.99，785.7ng/ul;2.02,1314ng/ul.我觉得值还是蛮好的。我检测RNA的时候上样量是2ul。用的是普通的检测DNA的器皿，不过新换的电泳缓冲液。

2012-9-5-4.jpg



2012-9-6-2.jpg

[ Last edited by yananhl on 2012-9-7 at 10:44 ]
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1楼 2012-09-05 16:37:03
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angel_yy

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
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yananhl: 金币+1, 谢谢 2012-09-06 09:56:31
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-09-06 13:56:14
之前提过好多次RNA  人的肝癌组织的，每次的质量都挺好的，说说我的方法，首先要确保所用的移液器和枪头是RNase-free的  最好买进口的，提组织的时候研磨用的研钵和研钵棒要用DEPC水浸泡24h然后高压灭菌，最后烘干，烘干的过程中要用锡箔纸包封好。在研磨前最好把研钵和钵棒放在冰箱中预冷。磨组织的时候要在冰上，并且研钵中要加入trizol和液氮，磨的时候要快。另外就是要戴好手套和口罩。还要注意不要让大家在你身边来回走动，在实验过程中尽量不要对着试验台说话，提RNA的试验台要远离提质粒的试验台。我觉得这些都注意了应该就不会有什么问题了，希望对LZ会有帮助。

[ Last edited by angel_yy on 2012-9-5 at 20:56 ]
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13楼2012-09-05 20:54:46
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liuguilin

禁言 (文学泰斗)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
以前读书时，有人专门晚上实验室人少时，提rna
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2楼2012-09-05 16:51:19
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xfliu

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我要提500多个呢，现在提了100多个，质量还行
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3楼2012-09-05 16:53:43
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asdkingstar

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
呵呵，同是天涯“沦落”人。深刻体会楼主此时的心情。
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4楼2012-09-05 17:06:35
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