24小时热门版块排行榜    

查看: 1925  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

roy5513

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题

各位大神,我的蛋白加上组氨酸标签后理论大小约8.5KDa,经Ni亲和层析纯化后进行透析浓缩,之后跑蛋白电泳发现大小小于6KDa,这是怎么回事啊?两个蛋白都是这样。在进行蛋白水平之前工程菌的质粒都经过测序验证,插入片段的序列都正确。求大神指教啊!!!!!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

专业知识

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rfengyi

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

9楼2012-08-24 08:58:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为电泳是定性的分析,再者到小分子量时候,电泳会不准的。
最好的方法是质谱检测下。
2楼2012-08-22 08:51:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-22 15:19:02
首先确定是蛋白没有挂上柱子都流穿了,还是蛋白没有被洗脱下来。原因可能有很多,比如组氨酸标签没有完全暴露或者丢失,或超声的功率太大,蛋白炭化,没有释放出来。可以在变性条件下用4M-6M盐酸胍进行纯化;若是洗脱有问题可以增加咪唑的梯度洗脱或加非离子去污剂(2%TritonX-100)至缓冲液中防止非特异性疏水作用。。。。。得自己慢慢摸索呀,祝实验顺利!能把图片发上来看看吗?
3楼2012-08-22 09:06:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:10
想问下,你是跑的SDS-PAGE么?对于分子量小于15KD的,一般都介意跑tricine sds page,用小MARKER,虽然过程比较麻烦,但是看得稍微准确一点。
其次,跑胶看大小,其实也只能当做是一种大致的辨认手段,很多时候蛋白都会出现偏大或者偏小的情况,想要比较精确的知道,有条件的话,就最好去打个MS确认一下。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-08-22 10:17:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分,有科研经历,求调剂 +4 一瓶苯甲酸 2026-03-14 4/200 2026-03-20 20:36 by fen_rao
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-03-18 5/250 2026-03-20 09:00 by ZHANG0tao
[考研] 材料专硕英一数二306 +6 z1z2z3879 2026-03-18 6/300 2026-03-20 08:49 by xingguangj
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 0817调剂 +3 没有答案_ 2026-03-14 3/150 2026-03-19 09:51 by Xu de nuo
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
信息提示
请填处理意见