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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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allegro1741

新虫 (小有名气)

[求助] Q-PCR和RT-PCR结果不一致呢?

做了两次定量(Q)-PCR,一个基因的转录量都是降低的,可每次做半定量(RT)-PCR结果又显示升高,这是怎么回事?半定量的cDNA也经过稀释,不存在饱和现象...
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gl185

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-14 13:49:31
实时定量PCR和半定量PCR结果不相同很正常,毕竟半定量PCR的误差很大,在做半定量的时候,你一定要把内参基因调的,在各个组织中表达量是一样的,这样才能做目的基因。而实时定量PCR就不存在这样的问题,所以我觉得还是你的半定量可能调的cDNA没有调好
2楼2012-08-14 12:32:09
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,还需要考虑另外一个问题,做普通RT时用的PCR 成分都是普通的,而Q用的是公司定制的,其BUFFER差异很大,因为公司定的BUFFER我们不知道里面的具体成分,因此,两者结果不一致也正常。再者二者反应条件也不完全一致。
3楼2012-08-14 19:49:54
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woshizhufeng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
实时定量PCR和半定量PCR二者的精确度是不一样的,所以不相同很正常啊,半定量PCR的误差比较大,现在也有做的,但用的比较少了。实施荧光定量PCR受cDNA的浓度和质量影响也比较大,所以要保证你的模板质量没有问题。多做几次吧,看趋势就好了。
4楼2012-08-15 08:54:39
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