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引物设计区域选择问题
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我设计兼并引物。多序列比对发现三个保守区。一个在中上游，一个在中游，一个在下游末。我准备选中上游和下游末分别设计上下游引物。但老师说选中游设计简并引物就可以了。有经验的朋友能告诉我我该选哪个保守区设计引物吗？设计多少对比较好？用来扩增未知基因保守区。 [ Last edited by 1949stone on 2012-8-20 at 07:49 ] |
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 实验操作 |
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3楼2012-08-20 00:36:18
【答案】应助回帖
★ ★
fengyunqb: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 哈哈，万分感谢。 2012-08-21 12:52:24
fengyunqb: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 哈哈，万分感谢。 2012-08-21 12:52:24
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你仅仅知道氨基酸序列？或是其他物种的基因序列？ 你目前的情况，兼并引物已经设计好，可以先试一下PCR，如果得到你的预期大小的片段，胶回收，连接T-vector，测序。 在做PCR扩增时，注意变换条件，特别是复性（退火）温度，开始的时候先从温度相对较低比如50-55度开始，多变几个温度，然后根据条带调整条件。 也可以用降落PCR，不用理会复性温度。 所用的核酸，DNA或者RNA一定要纯，最好用适量，一般1000-10000个拷贝比较合适。如果是RNA，最好用mRNA。 最后，祝你好运！ |
6楼2012-08-20 23:08:09