| 查看: 2655 | 回复: 16 | ||
| 本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
celia2012铜虫 (小有名气)
|
[求助]
揪心的菌落PCR 已有2人参与
|
|
|
几天挑选了单菌落，进行种属鉴定，做了17个菌落PCR，成功了11个，实验过程是：挑菌加入50微升无菌水，99度裂解5分钟，后冰浴五分钟，离心10分钟取上清液进行PCR,退火温度是55度，循环数35，25微升体系（加5微升模板） 后来继续挑选进行实验，问题不断，P出来的成功率低，不到一半，而且好多出现拖带现象，这在第一次实验中没出现过，后进行测序说是有杂合、结合现象，测序终止，立马心情受到影响了，做了大量的菌落PCR， 几天全浪费了~不知道是什么原因 1.由于我做的菌差异大，要一一摸条件好烦，有的浓度低了，有个又高了，难以控制，挑菌不知道挑多少合适 2.不知道做菌落PCR,是不是要将菌活化一下再挑，菌放在冰箱大概有20天了，菌放的时间长了是不是影响实验 3.退火温度如何确定，多少适合？是否循环数过高了 4.菌落PCR是否可靠？还是直接先提DNA适合？主要是我要做200个菌，提起来麻烦，现在看来菌落PCR也不简单？ 希望有经验的虫友们给点意见吧~万分感谢啊~纠结万恶的实验啊~  |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有22人回复
-
322求调剂：一志愿湖南大学 材料与化工（085600），已过六级。
已经有7人回复
-
332求调剂
已经有5人回复
-
310求调剂
已经有10人回复
-
26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂
已经有5人回复
-
085600 材料与化工 329分求调剂
已经有15人回复
-
化学0703 调剂 306分 一志愿211
已经有8人回复
-
342求调剂
已经有4人回复
-
334分 一志愿武理 材料求调剂
已经有14人回复
-
材料科学与工程 317求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌落PCR筛选
已经有17人回复
- 菌落PCR无条带
已经有19人回复
- 关于转化、菌落PCR
已经有8人回复
- 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
已经有28人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】菌落PCR的条件
已经有14人回复
- 【求助/交流】菌落PCR扩出来的片段不是目的片段，咋办啊？？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】菌落PCR求助
已经有23人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有23人回复
- 【求助/交流】酵母菌落PCR
已经有12人回复
阿博小硕士
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 46.8
- 散金: 2
- 帖子: 78
- 在线: 15.7小时
- 虫号: 1239315
- 注册: 2011-03-20
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
9楼2012-08-10 14:14:11
2楼2012-08-09 17:50:37
celia2012
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 236.4
- 散金: 42
- 帖子: 116
- 在线: 54.7小时
- 虫号: 1654655
- 注册: 2012-03-01
- 专业: 景观与区域生态学
3楼2012-08-09 19:09:49
4楼2012-08-09 19:25:59
10