24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2407  |  回复: 16
本帖产生 1 个 MicEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, MicEPI+1, good 2012-08-10 16:21:22
对于你的问题,我仅仅结合我做菌落PCR的情况,讨论一下你说的4个问题。
1.菌落PCR挑菌,不要总是挑一大团你看得见心里才放心,只需要牙签尖头轻轻刮一下即可,多了会影响PCR结果的。
2.平板放的时间越长,菌落PCR的结果越不准确,建议还是尽快做菌落PCR验证。但并不是说时间久就难P出来,而是结果不准确。因为4度菌是可以生长的。当然,我觉得没有活化的必要。本来时间就久,如果还活化,容易造成交叉污染。
3.退火温度最好是选择阳性对照做一个梯度PCR确定。如果你是通用引物,一般55度是没有问题的。当然你也可以根据公式算,算出来减小5到10度就可以了。
4.菌落PCR是可靠的,但是一般要结合其它的方法一起证明。你决定菌落PCR是因为你的平板放在4度,菌还在生长,特别是多次挑菌之后容易造成交叉污染。所以一般你的平板出来后,尽快做菌落PCR是没有问题的。在得到阳性结果后就马上划线到一个新的平板,保藏菌种。以免交叉污染影响后续试验,更让你怀疑菌落PCR的准确性。

简单交流,仅供参考。
11楼2012-08-10 16:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子,希望有用哦~

科研从小木虫开始,人人为我,我为人人
相关版块跳转 我要订阅楼主 celia2012 的主题更新
信息提示
请填处理意见