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77638333金虫 (著名写手)
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[求助]
请问Real time q PCR一定要做融解曲线吗？
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| 有没有具体的protocol？谢谢 |
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chenguestc
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【答案】应助回帖
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77638333: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢。qPCR参数已经有了。融解曲线的protocols能否详细一些？ 2012-08-01 22:25:14
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极热心的帮忙解答问题 2012-08-02 15:29:35
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是的。溶解曲线是必须做的。 我们常用到的qPCR supplies 及用量（1个反应，20ul体系）如下，楼主可根据这个用量适量调整： TBSYBRmix 10 ul PrimerF (10uM) 0.6 ul PrimerFR (10uM) 0.6 ul cDNA (20ng/ul) 2 ul Reference dye 0.4 ul ddH2O 6.4 ul PCR条件： 95度 1min 40x 95度 15s 60度 45s 最后，melt curve 95度 15s 60度 45s 95度 15s 可适当调整。 |
2楼2012-08-01 22:10:17
chenguestc
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【答案】应助回帖
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溶解曲线只是PCR仪的其中之一的功能，我在做PCR时有的会用到，有的不需要做，看你做什么实验。分享下我的PROTOCOLS: 预变性： 95℃ 5min *1 PCR ： 95℃ 10s 60℃ 15s *50 72℃ 25s HRM ： 95℃ 1min 40℃ 1min *1 65℃ 1s 95℃ 检测荧光 COOLING: 40℃ 10S 希望对你有帮助！！ |
4楼2012-08-02 09:37:38
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