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Real-time PCR
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各位大侠好！ 目前我遇到了一个困难需要帮忙！我选取了实验物种的mtDNACOI基因的一对通用引物，将其PCR扩增以后克隆之后进行测序，序列长度666bp.我从这666bp序列中想筛选这一物种的特异性引物做Real-time PCR ，可由于我的这一物种是最新发现的ncbi上检索不到这一物种序列，只有同一个科的序列，而且这一物种与同一科的另一物种相似性高达96.8%，从而造成设计引物探针都比较困难！我设计了一对特异性不理想我想问一下我该怎么办？是不是应该选取mtDNACOI之外的其他片段从而寻找差异性较大的序列从中设计特异性引物？我该如何寻找这一物种的特异性引物？我将不胜感激 |
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