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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
77638333: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢。qPCR参数已经有了。融解曲线的protocols能否详细一些? 2012-08-01 22:25:14
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极热心的帮忙解答问题 2012-08-02 15:29:35
是的。溶解曲线是必须做的。
我们常用到的qPCR supplies 及用量(1个反应,20ul体系)如下,楼主可根据这个用量适量调整:
TBSYBRmix                 10 ul
PrimerF (10uM)           0.6 ul
PrimerFR (10uM)         0.6 ul
cDNA (20ng/ul)           2 ul
Reference dye             0.4 ul
ddH2O                        6.4 ul

PCR条件:
95度 1min
40x  95度 15s
       60度 45s
最后,melt curve
       95度 15s
       60度 45s
        95度 15s
可适当调整。
2楼2012-08-01 22:10:17
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