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西区五号楼

新虫 (小有名气)

[求助] 昆虫DNA提取,没结果啊!

用CTAB法提取一种虫子的DNA,结果好干净啊!除了MARKER什么都看不到啊!已经不是第一次这样了啊!但是没有DNA的做PCR却是有结果的,这是闹哪样啊!用异丙醇醇沉是不是不对啊?还是我抽提的次数过多了呢?
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立志美丽

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以换DNA试剂盒试试
2楼2012-08-01 11:18:30
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-01 14:04:00
你自己提取的话,很多试剂都是自己配制的,有时候不一定是哪个试剂出问题,所以建议你把所有试剂换一下,或者你要是嫌麻烦的话,就换嫌疑最大的试剂,我以前做过CTAB提DNA,有一次就是因为TE buffer的pH出问题导致实验做不出来;或者你直接去买试剂盒得了,方便还便宜,省事;做PCR的时候可以考虑加阴性对照
3楼2012-08-01 11:23:35
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 立志美丽 at 2012-08-01 11:18:30
可以换DNA试剂盒试试

换哪种的呢?一般都是用什么试剂盒啊?谢谢喽!
4楼2012-08-01 14:05:00
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-08-01 11:23:35
你自己提取的话,很多试剂都是自己配制的,有时候不一定是哪个试剂出问题,所以建议你把所有试剂换一下,或者你要是嫌麻烦的话,就换嫌疑最大的试剂,我以前做过CTAB提DNA,有一次就是因为TE buffer的pH出问题导致实 ...

嗯,我也想用试剂盒~请教一下:我的目的其实是做线粒体基因组,我是不是可以用提质粒的试剂盒呢?
5楼2012-08-01 14:06:08
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西区五号楼: 金币+3, 有帮助 2012-08-01 21:22:54
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-02 15:26:47
不可以的,我感觉,我以前做过mtDNA,都是直接提取基因组,虽然它是环状,具体我没试过,你可以试试,但还是建议你先按部就班的来,等出了好的结果之后再去实现你的新想法
6楼2012-08-01 16:17:22
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ZOEY21

金虫 (小有名气)


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-02 15:27:08
楼主你意思是电泳看不到DNA条带,但是PCR结果跑电泳能看到条带是吗?如果这样,我建议,PCR设阴性对照,如果阴性对照没有条带而目的样品出现条带那应该没什么好担心的。因为琼脂糖电泳毕竟没那么精确,很可能手提DNA量太少,在紫外下看不出来但能PCR出条带。但你如果一定要在文章里要一张DNA的电泳图,那...
BTW我的经验,试剂盒提取DNA质量较手提纯但浓度更低
7楼2012-08-02 08:49:22
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ximenzoe

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
难道是蛋白太多,CTAB没提出来,试一下蛋白酶K法?
8楼2012-08-02 17:53:19
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西区五号楼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ximenzoe at 2012-08-02 17:53:19
难道是蛋白太多,CTAB没提出来,试一下蛋白酶K法?

在改变了一些相应的抽屉步骤后,终于提出来了。
9楼2012-08-05 09:08:32
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