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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白电泳条带很异常，求高手指点
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qiuyu618

铜虫 (正式写手)

[求助] 蛋白电泳条带很异常，求高手指点

最近实验室跑蛋白胶老是出现问题，上传几张图上来请高手指教
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    • 2012-07-30 15:42:22, 1.54 M

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1楼 2012-07-30 15:46:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

黄油411

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by qiuyu618 at 2012-08-01 11:43:46
换什么buffer?蛋白缓冲液还是跑胶的loading buffer?...

是换runing buffer，就是不泡脚时候加到电泳槽里面的液体
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专心做抗体
12楼2012-08-02 10:58:42
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普通回帖

dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qiuyu618: 金币+1, ★有帮助 2012-07-31 08:37:12
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-31 13:45:12
是不是上样样品存放时间过久导致条带变得弥散且偏离目的位置？
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没有梦就走，没有错就不向谁低头
2楼2012-07-30 20:44:31
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qiuyu618

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dongniaoxin at 2012-07-30 20:44:31
是不是上样样品存放时间过久导致条带变得弥散且偏离目的位置？

也没有太久，而且是在-20度存放的，不到一周
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3楼2012-07-31 08:36:58
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dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

★
1949stone: 金币+1, 可以验证下效期 2012-08-14 07:27:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by qiuyu618 at 2012-07-31 08:36:58
也没有太久，而且是在-20度存放的，不到一周...

那你在使用之前需要离心处理一下，而且样品最好现用现制
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没有梦就走，没有错就不向谁低头
4楼2012-07-31 10:14:16
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qiuyu618

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dongniaoxin at 2012-07-31 10:14:16
那你在使用之前需要离心处理一下，而且样品最好现用现制...

你是觉得是蛋白沉淀了吗？
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5楼2012-07-31 11:32:36
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qiuyu618: 金币+1, 胶，电泳液都是新的，有一张图是稀释的，也是一样的 2012-07-31 12:37:01
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-31 13:45:28
qiuyu618: 金币+1, ★有帮助 2012-07-31 17:08:35
我觉得你的上样量有点多，然后就是上样前可以离心一下，取上清，然后胶应该用新配的，电泳液换新的
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6楼2012-07-31 11:49:19
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healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qiuyu618: 金币+2, ★有帮助 2012-07-31 17:08:46
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-01 14:05:33
本帖内容被屏蔽
7楼2012-07-31 14:51:17
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qiuyu618

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by healy13 at 2012-07-31 14:51:17
你蛋白的buffer中有没有尿素，如果有上样前要加热离心下；
或蛋白沉淀，上样前离心几分钟试试；
最后可以减少一下上样量试试~

没有，buffers是PBS
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8楼2012-07-31 17:09:42
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dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

★
qiuyu618: 金币+1, ★有帮助 2012-08-01 11:44:21
引用回帖:
5楼: Originally posted by qiuyu618 at 2012-07-31 11:32:36
你是觉得是蛋白沉淀了吗？...

我觉得有可能，而且因为上样缓冲液中SDS的存在会在低温下结晶
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没有梦就走，没有错就不向谁低头
9楼2012-08-01 08:21:26
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黄油411

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qiuyu618: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-01 11:44:28
换新的runing buffer就OK了，我以前出现同样的问题
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专心做抗体
10楼2012-08-01 09:37:05
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