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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR出现杂带是什么原因？
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skuy1223

金虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR出现杂带是什么原因？ 已有2人参与

我扩增的目的基因大概180bp的大小，扩全长、胶回收直到菌液PCR该位置都有明亮的条带。但是同时也一直出现一个问题，那就是在靠近400bp（大概380bp左右）的位置也同样出现了较暗，但是也明显的条带。这个问题在胶回收的时候我已经发现了，本来我以为是因为胶切的不好。但是挑了单克隆之后，做菌液PCR那个位置居然又出现了很暗的条带（当然180bp有明亮的带）。这个时候我就不淡定了……不知有没有哪位高手有没有遇到过类似的情况？有的话敬请指点具体是什么原因、对后续的蛋白表达是否有影响？感激不尽！！！
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努力！
1楼 2012-07-29 19:06:52
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skuy1223

金虫 (小有名气)
各位请多多指教啊！！
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努力！
2楼2012-07-29 19:09:06
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thunder00

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是引物和模板错配，菌液Pcr和酶切鉴定都只是初步鉴定，你提重组质粒测序没问题就可以。
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3楼2012-07-29 21:43:53
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weishu杯子

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是引物二聚体呢？
可以适当减少引物量看看
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快乐源于生活!!
4楼2012-07-30 07:51:52
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healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-30 13:44:01
skuy1223: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-07-30 20:57:28
本帖内容被屏蔽
5楼2012-07-30 09:45:16
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-30 13:44:09
skuy1223: 金币+1, ★有帮助, 希望如此 2012-07-30 20:57:45
这个，我没遇到过。
我觉得只要不影响你的质粒序列，不影响转化，对你最终蛋白表达是没问题的，毕竟前期这些步骤只是构建，只是初步检验。
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6楼2012-07-30 09:50:36
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斯多格格

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我遇到过，但是重做一次又没有了，你重复没有？每次都这样么？
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书自香我何须花
7楼2012-07-30 09:56:40
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，用你的菌液提质粒，然后进行单、双酶切，跑个胶就清楚了，一定加个MARKER。
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8楼2012-07-30 12:24:40
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skuy1223

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 斯多格格 at 2012-07-30 09:56:40
我遇到过，但是重做一次又没有了，你重复没有？每次都这样么？

只是想先搞清楚是什么原因……
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努力！
9楼2012-07-30 20:50:58
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skuy1223

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-07-30 09:50:36
这个，我没遇到过。
我觉得只要不影响你的质粒序列，不影响转化，对你最终蛋白表达是没问题的，毕竟前期这些步骤只是构建，只是初步检验。

希望如此！谢谢！
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努力！
10楼2012-07-30 20:51:40
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