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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR出现杂带是什么原因？
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skuy1223

金虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by healy13 at 2012-07-30 09:45:16
基本上是你模板中的非特异性扩增，你可是试着减少模板浓度或引物浓度。再说菌液PCR是初步鉴定，只要有明显的目的条带基本上没多大问题，最主要还是要你质粒提取后的特异性引物的PCR~送测检测成功就不会影响后续蛋白 ...

如上所述，各个步骤会在380bp左右出现神秘的条带，而且我在切胶的时候注意到了这个问题，并且这两条条带并不是靠的很近，我基本上可以肯定没有切到其它条带。而且单个菌落应该是只有一个克隆子出现的。看了大家的回复，也希望只是非特异性扩增。谢谢！！
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努力！
11楼2012-07-30 20:56:47
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skuy1223

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weishu杯子 at 2012-07-30 07:51:52
会不会是引物二聚体呢？
可以适当减少引物量看看

应该不是！谢谢回复！
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努力！
12楼2012-07-30 20:58:29
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skuy1223

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by thunder00 at 2012-07-29 21:43:53
可能是引物和模板错配，菌液Pcr和酶切鉴定都只是初步鉴定，你提重组质粒测序没问题就可以。

准备测序看看！
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努力！
13楼2012-07-30 20:58:53
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yingying1588
14楼2013-03-02 00:17:21
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知来者之可追

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是引物特异性不高 可以试试提高退火温度一两度，看还有没有 不过应该没事的，可以先忽略
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15楼2013-03-24 22:00:39
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huijhruby

木虫 (正式写手)
我今天也遇到了这样的情况，不知道楼主有没有找到原因？
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16楼2014-10-24 15:15:29
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还是测序吧，我也遇到过这个问题，但后期不是做表达，测序后也没有问题，也没有提醒有双峰什么的。
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17楼2014-10-24 18:11:22
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ykluuniu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.菌液PCR出杂带很正常啊，不能酶切鉴定吗？推荐酶切鉴定，靠谱。
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18楼2014-10-24 21:57:03
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