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lpsyz007

新虫 (小有名气)

[求助] PCR反应体系求助

本科菜鸟PCR个人用的的是20(单位微升)的体系大概是BUFFER 2.0 dNTPs 0.4 Tap 0.4 正反引物 2 模板DNA 1.2 水 14.这是我用的 最后老师说这个体系做不出,我看了一下老师的体系BUFFER 2.0 dNTPs 0.3 Tap 0.5 正反引物 2 模板DNA 2 水 13.2.求高手给个解释啊!!!!!我的体系是什么问题???
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renzhiq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你们是什么学校,什么老师?给你个正确的体系:BUFFER 2.0,dNTPs 1.6(2.5 each),Taq 0.2(5U), 正反引物1(10uM), 模板DNA 0.5, 水 up to 20.
8楼2013-05-01 20:45:32
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查看全部 11 个回答

eargle

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-16 13:54:11
你的PCR体系DNA还是要加到2ul,你在配你的PCR反应体系时,不要光看别人的体系,还要看他加那些材料的浓度是多少,不能盲目照搬。
你若用20ul的反应体积,BUFFER(加Mg) 2.5  dNTPs 0.5  Tap 0.4 正反引物 各1  模板DNA 2 水 12.6.  可以试一下
一般PCR反应用25ui的比较多些,也有用50ul的。
结识每个虫友,将是我的又一大荣幸!
2楼2012-07-16 12:33:41
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lpsyz007

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by eargle at 2012-07-16 12:33:41
你的PCR体系DNA还是要加到2ul,你在配你的PCR反应体系时,不要光看别人的体系,还要看他加那些材料的浓度是多少,不能盲目照搬。
你若用20ul的反应体积,BUFFER(加Mg) 2.5  dNTPs 0.5  Tap 0.4 正反引物 各1  模板 ...

dNTPs和Tap的量比如有什么比例之类的 还有就是正反引物和模板DNA要一样??这是为什么呢?
3楼2012-07-16 20:35:47
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-18 13:48:00
购买的酶的公司网站应该有酶的说明书,不过个人觉得,模板还是加少点,之前试过模板加多,后来减少模板,杂带会明显减少,现在一直都是加20纳克/微升,这只是我的做法,希望对你有帮助。
4楼2012-07-17 07:27:51
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