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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr总是p不清楚
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abram995

新虫 (小有名气)

[求助] pcr总是p不清楚

目的片段大概是450bp左右，之前样品pcr也是做不好，但还有些条带，没出现过这个情况。还有右侧的两个可以做DGGE吗？

左侧14个事割胶后的pcr电泳图



这是对应的DGGE图
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1楼2012-07-05 10:04:41
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wangning__

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果一直是这样的结果，可能是你的样品中含有抑制PCR的物质，看你使用的什么方法提取的呢，考虑试剂盒法。这样的结果做DGGE结果肯定不好，还是优化下条件吧。
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乌拉拉
3楼2012-07-19 20:05:56
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极应助，解答问题 2012-07-20 13:41:20
PCR从电泳图看拖尾的比较厉害，而且图标注信息太少，Mark多少的？体系怎样的？PCR条件呢？
拖尾主要下面几个原因
1.模板不纯，楼主PCR的模板纯度如何，测过没.
2.Buffer不合适，这个可能性比较小，看看是否对于酶的Buff用错了，或者污染了.
3.退火温度偏低，可以试着提高温度，梯度PCR一下看看.
4.酶量过多
5.dNTP、Mg 2+浓度偏高
6.循环次数过多
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-05 14:45:06
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

提高退火温度
降低循环数
减少镁离子用量
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4楼2012-07-20 08:24:42
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