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abram995

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[求助] pcr总是p不清楚

目的片段大概是450bp左右，之前样品pcr也是做不好，但还有些条带，没出现过这个情况。还有右侧的两个可以做DGGE吗？

左侧14个事割胶后的pcr电泳图

这是对应的DGGE图

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1楼2012-07-05 10:04:41

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Marado

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【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+3, 鼓励积极应助，解答问题 2012-07-20 13:41:20

PCR从电泳图看拖尾的比较厉害，而且图标注信息太少，Mark多少的？体系怎样的？PCR条件呢？
拖尾主要下面几个原因
1.模板不纯，楼主PCR的模板纯度如何，测过没.
2.Buffer不合适，这个可能性比较小，看看是否对于酶的Buff用错了，或者污染了.
3.退火温度偏低，可以试着提高温度，梯度PCR一下看看.
4.酶量过多
5.dNTP、Mg 2+浓度偏高
6.循环次数过多