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跋涉者米米

新虫 (初入文坛)

[求助] 纠结了很久的关于克隆文库的问题

大家好,我现在做了细菌的16s rDNA文库。
对于那个文库的覆盖率计算,一直都好纠结:
我举例说明哈,请教大家帮忙看看:
样品1,我挑了200个克隆子,然后200个克隆子经检验是阳性克隆子之后做酶切,根据酶切图谱的不同谱型,我把这两百个克隆子分成了85个otu,然后每个otu里面就挑了一个克隆子去测序,测得了85个序列。这85个序列经过NCBI去载体序列,去除嵌合体,最后剩下76个序列,也就是有9个嵌合体序列被去除了,那这9个嵌合体序列在之前的85个otu中包括的克隆子是不是也要一并去除呢?
剩下的76个序列用软件进行了otu的划分,得到了新的测序序列的otu组合,那我是不是要把前面酶切分的这些测序序列的otu里面的克隆子根据软件划分的测序序列的otu重新组合呢?
那覆盖率是按照测序序列划分的otu进行计算,以测序序列数目也就是76为基数,还是以重新整合后总的克隆子数,也就是200减去嵌合体及与嵌合体为同一个otu的克隆子数为基数呢?
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zhongzhen

铜虫 (初入文坛)

楼主,请问你是如何去载体序列,去除嵌合体,以及用软件进行了otu的划分的。跪求解答!
2楼2015-10-09 15:27:48
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