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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 请教各位大虫uplc峰型的问题，谢谢
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Rafael007

金虫 (小有名气)

[求助] 请教各位大虫uplc峰型的问题，谢谢

各位大虫门大家好，小虫现在有一色谱条件的问题请教大家，对于大家的帮助先在此谢过，每位回复的虫友我都会相应的赠送金币，谢谢。
问题是这样的，我最近在做几种二萜生物碱的分析，用的是uplc来做的，根据文献上的相关报道，选用的流动相是乙腈—10mmol/L碳酸氢铵（加氨水调至ph=10.5）溶液，选用的色谱柱是uplc的耐碱柱BEH C18，但是最后跑下来的结果是有些峰前延严重，峰型较差，下图中标的1号峰峰型还好，就是后面的五个峰型较差，想在此向大家请教这是什么原因，如何改善，要是都能像1号峰峰型就好了。谢谢大家。

图一是混标的色谱图，只有峰一峰型比较好，后面几个峰如何才能像峰一那样。
图二是混标和单标的对比图，放大之后，其他峰的峰型明显不好，基线也不平，如何调整呢。

这是图一，混标，只有峰一较好，其他的几个峰型都比较差



这是图二，混标和单标的对比图，单标放大后，峰型特别丑，而且基线特别的不平，我用的溶剂是二氯甲烷

[ Last edited by Rafael007 on 2012-6-9 at 16:33 ]
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1楼 2012-06-09 16:30:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

houqian387

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
Rafael007: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-12 14:23:45
1、首先回答你二氯甲烷的问题
二氯甲烷和反相的水不互溶，当二氯甲烷带着样品进入色谱系统的时候，不能很好的和流动相互溶，导致样品不能和色谱柱发生正常的分配作用，出来的峰有可能不是正态分布。还有一点：二氯甲烷会损伤C4,8,18这样的色谱柱。
2,、再说运行时间的问题，大多数情况下（分离，峰形，定量可接受），运行时间要根据色谱峰的k值来定，k值在2-10左右的运行时间是最合适的。
k=    （保留时间-死时间）/死时间
希望能帮到你
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Rafael007
18楼2012-06-12 11:21:50
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xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)

魂兮

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, ★有帮助 2012-06-09 19:30:53
soundhorizo: 金币+2, 感谢应助 欢迎常来分析版交流指导^^ 2012-06-10 20:51:50
基线应该没问题，看图二，有两个波动都能重现，这没问题。第四个峰确实不太好，看看理论板数是多少，如果达到最低板数要求，应该就合格了。
也可以调下PH，看是不是PH影响的。
再不行就要换柱子。
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红颜远，相思苦，几番意，难相付。十年情思百年渡，不斩相思不忍顾！
2楼2012-06-09 17:52:39
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Rafael007

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by guevara1967 at 2012-06-09 20:46:10
UPLC跑到16min，时间太长了，把总时间设定在5~8min，梯度调的快些，峰形会改善

是吧，我也考虑了这一点，再试着把梯度斜率变大些，现在主要是进的标准品，这样子看着分离度很大，不确定进样品的时候中间是不是会有其他不能分开的。谢谢！
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5楼2012-06-09 21:30:42
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Rafael007

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by houqian387 at 2012-06-11 08:59:54
给你几点建议供参考：
1、同意前面的说法，运行时间太长
待测物的k值在2-10之间最合适，UPLC的死时间小于1min，所以整个运行时间在10min以内比较合适。
2、峰形问题：首先和运行时间有一定关系，然后流动相的pH ...

PH值是参考的文献当中的，这几种生物碱碱性不算太小，当然现在看峰型还得再调。对于为什么UPLC的时间一定要在10分钟左右我不是很清楚，那时间也跟流速，柱长有关吧。我这时间是uplc自带的转换程序根据HPLC的条件算出来的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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15楼2012-06-11 22:56:34
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许8660

金虫 (正式写手)
进样量是多少？怎么可以用二氯甲烷作为溶剂的呢？
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Rafael007
16楼2012-06-12 09:41:04
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lantao8823

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-12 14:24:55
1 基线没有问题的，
2 只要都能出峰，梯度也没有问题，
3 4号峰前沿可能 1）pH
                         2）溶解样品溶剂的溶解性大于流动相
                3）过载
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Rafael007
人生最重要的课题：学会坚强。
19楼2012-06-12 12:32:13
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a13738053065

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, ★有帮助 2012-06-12 14:25:23
楼主要是把液相条件提供一下会比较好
从图看，3分钟以后的梯度可以再快一点
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Rafael007
20楼2012-06-12 14:05:58
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普通回帖

Rafael007

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xbqewpq at 2012-06-09 17:52:39
基线应该没问题，看图二，有两个波动都能重现，这没问题。第四个峰确实不太好，看看理论板数是多少，如果达到最低板数要求，应该就合格了。
也可以调下PH，看是不是PH影响的。
再不行就要换柱子。

恩，试试PH的影响，主要是一般在uplc上跑出来的都是像1号峰那样的，峰型窄，看着也舒服，然后后面几个峰宽太大。
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3楼2012-06-09 19:30:40
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, ★有帮助 2012-06-09 21:31:01
soundhorizo: 金币+2, 应助辛苦 工作加油^_^ 2012-06-12 06:50:02
UPLC跑到16min，时间太长了，把总时间设定在5~8min，梯度调的快些，峰形会改善
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梦想、激情、灵感、体验--che
4楼2012-06-09 20:46:10
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vetszh1181

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, ★有帮助 2012-06-10 21:05:38
明显流动相梯度设置不合理，而且标准品稀释溶剂和流动相差别太大。可以尝试使用流动相稀释标准品，更改流动相梯度。
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Rafael007
6楼2012-06-10 20:26:34
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Rafael007

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by vetszh1181 at 2012-06-10 20:26:34
明显流动相梯度设置不合理，而且标准品稀释溶剂和流动相差别太大。可以尝试使用流动相稀释标准品，更改流动相梯度。

为什么说梯度明显不合理啊？基于何种考虑？之所以溶样的溶剂和流动相相差大是因为样品在非惰性有机溶剂中不太稳定，然后选用了二氯甲烷！不知乙腈是否属于惰性有机溶剂。
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7楼2012-06-10 21:05:28
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温炎

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+3, 鼓励新虫 欢迎讨论 ^_^ 2012-06-12 06:51:51
引用回帖:
4楼: Originally posted by guevara1967 at 2012-06-09 20:46:10
UPLC跑到16min，时间太长了，把总时间设定在5~8min，梯度调的快些，峰形会改善

5-8分钟时间是不是太短了，做混样时梯度对峰形影响也不小，我觉得他做的16分钟分离还不错呀。再改梯度还分得开吗？新手个人看法。
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人要活着才有希望！！
8楼2012-06-10 21:32:51
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温炎

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by vetszh1181 at 2012-06-10 20:26:34
明显流动相梯度设置不合理，而且标准品稀释溶剂和流动相差别太大。可以尝试使用流动相稀释标准品，更改流动相梯度。

我是新手，请问怎么看出标准品稀释溶剂和流动相差别，我是做液质的，我试过用有机和无机溶剂同时稀释标准品，影响不大，加酸和不加酸的能某一些标准品有很大的影响。现在刚开始学做液相，请多指教。
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人要活着才有希望！！
9楼2012-06-10 21:36:04
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qian_jian

新虫 (小有名气)
如果样品不稳定，那在流动相中分离时也不稳定的！

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10楼2012-06-10 22:26:09
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