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Rafael007

金虫 (小有名气)

[求助] 请教各位大虫uplc峰型的问题,谢谢

各位大虫门大家好,小虫现在有一色谱条件的问题请教大家,对于大家的帮助先在此谢过,每位回复的虫友我都会相应的赠送金币,谢谢。
问题是这样的,我最近在做几种二萜生物碱的分析,用的是uplc来做的,根据文献上的相关报道,选用的流动相是乙腈—10mmol/L碳酸氢铵(加氨水调至ph=10.5)溶液,选用的色谱柱是uplc的耐碱柱BEH C18,但是最后跑下来的结果是有些峰前延严重,峰型较差,下图中标的1号峰峰型还好,就是后面的五个峰型较差,想在此向大家请教这是什么原因,如何改善,要是都能像1号峰峰型就好了。谢谢大家。

图一是混标的色谱图,只有峰一峰型比较好,后面几个峰如何才能像峰一那样。
图二是混标和单标的对比图,放大之后,其他峰的峰型明显不好,基线也不平,如何调整呢。

这是图一,混标,只有峰一较好,其他的几个峰型都比较差



这是图二,混标和单标的对比图,单标放大后,峰型特别丑,而且基线特别的不平,我用的溶剂是二氯甲烷

[ Last edited by Rafael007 on 2012-6-9 at 16:33 ]
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Rafael007

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by houqian387 at 2012-06-11 08:59:54
给你几点建议供参考:
1、同意前面的说法,运行时间太长
待测物的k值在2-10之间最合适,UPLC的死时间小于1min,所以整个运行时间在10min以内比较合适。
2、峰形问题:首先和运行时间有一定关系,然后流动相的pH ...

PH值是参考的文献当中的,这几种生物碱碱性不算太小,当然现在看峰型还得再调。对于为什么UPLC的时间一定要在10分钟左右我不是很清楚,那时间也跟流速,柱长有关吧。我这时间是uplc自带的转换程序根据HPLC的条件算出来的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
15楼2012-06-11 22:56:34
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xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)

魂兮

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, 有帮助 2012-06-09 19:30:53
soundhorizo: 金币+2, 感谢应助 欢迎常来分析版交流指导^^ 2012-06-10 20:51:50
基线应该没问题,看图二,有两个波动都能重现,这没问题。第四个峰确实不太好,看看理论板数是多少,如果达到最低板数要求,应该就合格了。
也可以调下PH,看是不是PH影响的。
再不行就要换柱子。
红颜远,相思苦,几番意,难相付。十年情思百年渡,不斩相思不忍顾!
2楼2012-06-09 17:52:39
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Rafael007

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xbqewpq at 2012-06-09 17:52:39
基线应该没问题,看图二,有两个波动都能重现,这没问题。第四个峰确实不太好,看看理论板数是多少,如果达到最低板数要求,应该就合格了。
也可以调下PH,看是不是PH影响的。
再不行就要换柱子。

恩,试试PH的影响,主要是一般在uplc上跑出来的都是像1号峰那样的,峰型窄,看着也舒服,然后后面几个峰宽太大。
3楼2012-06-09 19:30:40
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, 有帮助 2012-06-09 21:31:01
soundhorizo: 金币+2, 应助辛苦 工作加油^_^ 2012-06-12 06:50:02
UPLC跑到16min,时间太长了,把总时间设定在5~8min,梯度调的快些,峰形会改善
梦想、激情、灵感、体验--che
4楼2012-06-09 20:46:10
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