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Rafael007

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 温炎 at 2012-06-10 21:32:51
5-8分钟时间是不是太短了,做混样时梯度对峰形影响也不小,我觉得他做的16分钟分离还不错呀。再改梯度还分得开吗?新手个人看法。...

这边提到的改梯度还是局部的修改,主要针对峰型,分离度现在已经很好了,没有什么分不开的。
11楼2012-06-11 08:50:52
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Rafael007

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 温炎 at 2012-06-10 21:36:04
我是新手,请问怎么看出标准品稀释溶剂和流动相差别,我是做液质的,我试过用有机和无机溶剂同时稀释标准品,影响不大,加酸和不加酸的能某一些标准品有很大的影响。现在刚开始学做液相,请多指教。...

他应该是从我放大了的那个基线看出的。
12楼2012-06-11 08:52:54
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houqian387

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-12 11:14:59
给你几点建议供参考:
1、同意前面的说法,运行时间太长
待测物的k值在2-10之间最合适,UPLC的死时间小于1min,所以整个运行时间在10min以内比较合适。
2、峰形问题:首先和运行时间有一定关系,然后流动相的pH值是否适合于所测样品。
13楼2012-06-11 08:59:54
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vetszh1181

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 温炎 at 2012-06-10 21:32:51
5-8分钟时间是不是太短了,做混样时梯度对峰形影响也不小,我觉得他做的16分钟分离还不错呀。再改梯度还分得开吗?新手个人看法。...

兄弟,UPLC-MS,5分钟已经很久了,看你的图,那峰的分离度都太大了。
14楼2012-06-11 17:03:42
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Rafael007

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by houqian387 at 2012-06-11 08:59:54
给你几点建议供参考:
1、同意前面的说法,运行时间太长
待测物的k值在2-10之间最合适,UPLC的死时间小于1min,所以整个运行时间在10min以内比较合适。
2、峰形问题:首先和运行时间有一定关系,然后流动相的pH ...

PH值是参考的文献当中的,这几种生物碱碱性不算太小,当然现在看峰型还得再调。对于为什么UPLC的时间一定要在10分钟左右我不是很清楚,那时间也跟流速,柱长有关吧。我这时间是uplc自带的转换程序根据HPLC的条件算出来的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
15楼2012-06-11 22:56:34
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许8660

金虫 (正式写手)

进样量是多少?怎么可以用二氯甲烷作为溶剂的呢?

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16楼2012-06-12 09:41:04
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Rafael007

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by 许8660 at 2012-06-12 09:41:04
进样量是多少?怎么可以用二氯甲烷作为溶剂的呢?

进样量是1.7微升。嗯,二氯甲烷为什么不能用呢?想请教一下,这些不是很懂。
17楼2012-06-12 11:11:51
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houqian387

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
Rafael007: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-12 14:23:45
1、首先回答你二氯甲烷的问题
二氯甲烷和反相的水不互溶,当二氯甲烷带着样品进入色谱系统的时候,不能很好的和流动相互溶,导致样品不能和色谱柱发生正常的分配作用,出来的峰有可能不是正态分布。还有一点:二氯甲烷会损伤C4,8,18这样的色谱柱。
2,、再说运行时间的问题,大多数情况下(分离,峰形,定量可接受),运行时间要根据色谱峰的k值来定,k值在2-10左右的运行时间是最合适的。
k=    (保留时间-死时间)/死时间
希望能帮到你

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

18楼2012-06-12 11:21:50
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lantao8823

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-12 14:24:55
1 基线没有问题的,
2 只要都能出峰,梯度也没有问题,
3 4号峰前沿可能 1)pH
                         2)溶解样品溶剂的溶解性大于流动相
                3)过载

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人生最重要的课题:学会坚强。
19楼2012-06-12 12:32:13
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a13738053065

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Rafael007: 金币+2, 有帮助 2012-06-12 14:25:23
楼主要是把液相条件提供一下会比较好
从图看,3分钟以后的梯度可以再快一点

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20楼2012-06-12 14:05:58
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