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675250244

银虫 (小有名气)


[交流] 蛋白表达量的提高

最近用pET32a为载体表达一蛋白(30多KD),发现产量太低了,想通过优化培养基配方(如添加甘油等)提高其表达量,但一直不见效果,求解答。
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416114799

至尊木虫 (知名作家)



675250244(金币+1): 谢谢参与
表达量低主要问题还是诱导的问题,而你却去做了优化,优化了培养基只能让菌体长得更好,菌体量多了,可能表达量也对应增加;但是如果诱导的问题没有解决,菌体量再多也无济于事。所以建议从这个入手。如果你的启动子之类的没有问题,如楼上说的加IPTG是一种措施,但是不能够解决所有问题。表达量低原因有很多,最直接的就是IPTG诱导的问题;还有溶氧的问题;还有诱导时温度的问题,pH的问题。你必须结合你的菌,来做调整。一般诱导时温度要比未诱导前低,比如大肠杆菌的发酵最好是37°,但是诱导后就要调到30°。
23楼2012-06-15 20:25:46
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★
675250244(金币+1): 谢谢参与
scelab: 金币+2, 谢谢回复哦~ 2012-06-06 23:01:28
优化温度;IPTG浓度;实在不行只能进行密码子优化.
8楼2012-06-05 13:05:41
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)



675250244(金币+1): 谢谢参与
诱导型表达载体,增加诱导剂的量是促进表达的方法,试试看
9楼2012-06-05 14:47:20
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)



675250244(金币+1): 谢谢参与
加入IPTG,优化一下诱导的浓度、时间和温度,再试试从对数期开始诱导
12楼2012-06-06 11:35:33
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简单回复
2012-06-05 09:08   回复  
675250244(金币+1): 谢谢参与
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