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675250244

银虫 (小有名气)

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[交流] 蛋白表达量的提高

最近用pET32a为载体表达一蛋白（30多KD），发现产量太低了，想通过优化培养基配方（如添加甘油等）提高其表达量，但一直不见效果，求解答。

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1楼 2012-06-05 08:44:56

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416114799

至尊木虫 (知名作家)

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★
675250244(金币+1): 谢谢参与

表达量低主要问题还是诱导的问题，而你却去做了优化，优化了培养基只能让菌体长得更好，菌体量多了，可能表达量也对应增加；但是如果诱导的问题没有解决，菌体量再多也无济于事。所以建议从这个入手。如果你的启动子之类的没有问题，如楼上说的加IPTG是一种措施，但是不能够解决所有问题。表达量低原因有很多，最直接的就是IPTG诱导的问题；还有溶氧的问题；还有诱导时温度的问题，pH的问题。你必须结合你的菌，来做调整。一般诱导时温度要比未诱导前低，比如大肠杆菌的发酵最好是37°，但是诱导后就要调到30°。