应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测序正确的质粒用SfiI酶切不动，请问有什么相关文献吗
71/1返回列表
查看: 2097  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cqyniu

金虫 (小有名气)

[求助] 测序正确的质粒用SfiI酶切不动，请问有什么相关文献吗

测序正确的质粒用SfiI酶切不动，请问有什么相关文献吗？或者相关资料
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-04 18:10:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 貌似是一篇很有用的文献哈~ 2012-06-05 08:37:16
cqyniu: 金币+10 2012-06-05 09:53:03
SfiI requires two copies of its recognition sequence for cleavage to occur. The two sites can be on either the same or different DNA molecules. Wertzell L.M. et al., (1995) J. Mol. Biol. 248:581-595.
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-04 18:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cqyniu: 金币+5 2012-06-05 08:18:09
1.sfi识别序列长，本身就不是很好切，建议延长酶切时间
2.用常用的酶切载体，看看载体制备有问题没有
3.用sfi切别的质粒（如果有的话），看看酶有问题没有
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-04 20:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jasco at 2012-06-04 20:46:32
1.sfi识别序列长，本身就不是很好切，建议延长酶切时间
2.用常用的酶切载体，看看载体制备有问题没有
3.用sfi切别的质粒（如果有的话），看看酶有问题没有

你说的这几点我都试过了
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-05 08:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gongeleven at 2012-06-04 18:39:02
SfiI requires two copies of its recognition sequence for cleavage to occur. The two sites can be on either the same or different DNA molecules. Wertzell L.M. et al., (1995) J. Mol. Biol. 248:581-595.

您好，请问您有这篇文献吗？方便的话给我传一份
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-05 09:52:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cqyniu: 金币+15, ★★★很有帮助 2012-06-05 11:18:40
引用回帖:
5楼: Originally posted by cqyniu at 2012-06-05 09:52:15
您好，请问您有这篇文献吗？方便的话给我传一份...

就是这篇文献，请查收
赞一下 回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : The SfiI Restriction Endonuclease Makes a.pdf
    • 2012-06-05 10:37:46, 713.87 K
6楼2012-06-05 10:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

157382

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cqyniu: 金币+2 2012-06-08 10:44:49
这个酶非常特别， 需要高的反应温度， 过夜培养。
1.特别要注意DNA的纯度，一定要高。
2. 如果是在质粒上， 应该没啥问题；如果是在PCR产物中， 要看看有没有保护碱基。
3. 需要酶切过夜，用新酶。
4. 因为是高温酶切， 所以建议用个小管做酶切， 比如PCR管，因为如果用1.5ml的EP管做酶切的话， 第二天， 你就会发现盖子上， 有很多结晶水， 而底部的体积都蒸发到顶上去了。 这一点特别重要
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-05 11:12:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cqyniu 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭