24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1579  |  回复: 3

胡化静

木虫 (小有名气)

[求助] sfiI和NotI双酶切

我想做sfiI和NotI双酶切,因为两者酶切Buffer不一样,所以只能单酶切。如图,第2、3泳道是先sfiI单酶切,然后在混合物中直接加入NotI及Buffer,进行NotI单酶切。结果看不见切下的700bp片段,只有四千多的大片段。第4、5泳道是先sfiI单酶切,然后电泳、胶回收,进行NotI单酶切。结果就看不见条带了。我该怎么切,才能切下来?
sfiI和NotI双酶切
无标题-1.jpg
回复此楼
啦啦啦
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woai43

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
胡化静: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-18 18:58:23
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-19 01:26:32
两个酶buffer不同还是需要单酶切后再回收吧。你sfiI单酶切割胶回收后有没有电泳检测?有可能你胶回收损失太多了,后面再进行NotI单酶切由于没有DNA了所以电泳就看不到了。你第一个酶切过先电泳看下DNA的量,再做第二个酶切。
2楼2013-10-18 16:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozhou0904

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-19 01:26:39
由于两个酶的要求温度或是条件不同,建议做完第一刀酶切,做PCR回收,然后再做第二次酶切!
3楼2013-10-18 17:00:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡化静

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by woai43 at 2013-10-18 16:48:50
两个酶buffer不同还是需要单酶切后再回收吧。你sfiI单酶切割胶回收后有没有电泳检测?有可能你胶回收损失太多了,后面再进行NotI单酶切由于没有DNA了所以电泳就看不到了。你第一个酶切过先电泳看下DNA的量,再做第二 ...

好的,我试试。
啦啦啦
4楼2013-10-18 18:57:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 胡化静 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料0856 英一数二 323 求调剂 +11 袁sy 2026-04-01 11/550 2026-04-05 11:30 by 风雨无晴
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 343求调剂085601 +6 要努力学习x 2026-03-29 7/350 2026-04-03 19:49 by 百灵童888
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by AZMK
[考研] 320求调剂 +5 振—TZ 2026-04-02 5/250 2026-04-03 14:42 by fxue1114
[考研] 一志愿华东理工大学,080500学硕,317分,求调剂 +13 s1145 2026-03-31 15/750 2026-04-03 11:44 by msi123
[考研] 275求调剂 +14 waltzh 2026-04-01 14/700 2026-04-03 11:24 by qqq850810
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-04-02 3/150 2026-04-03 08:44 by yulian1987
[考研] 一志愿复旦材料,英一专硕,总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 260求调剂 +6 朱芷琳 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:27 by 6781022
[考研] 085602化工求调剂(331分) +9 111@127 2026-03-30 9/450 2026-04-02 20:00 by dick_runner
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-04-02 3/150 2026-04-02 15:06 by cal0306
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
[考研] 314求调剂 +11 1xiaojun23 2026-03-31 12/600 2026-04-02 12:31 by 1xiaojun23
[考研] 【求调剂】新能源材料本科,一志愿211,初试321 +6 求调剂学校, 2026-04-02 6/300 2026-04-02 09:41 by 晴空210210
[考研] 349求调剂 +6 吃的不少 2026-04-01 6/300 2026-04-01 17:55 by JYD2011
[考研] 085600,321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-31 13/650 2026-04-01 12:35 by chemdavid
[考研] 08工科,295,接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-31 6/300 2026-04-01 11:02 by 逆水乘风
[考研] 物理学调剂 +4 小羊36 2026-03-30 4/200 2026-03-31 16:16 by lishahe
信息提示
请填处理意见