24小时热门版块排行榜    

查看: 2088  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)

[求助] 测序正确的质粒用SfiI酶切不动,请问有什么相关文献吗

测序正确的质粒用SfiI酶切不动,请问有什么相关文献吗?或者相关资料
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

157382

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cqyniu: 金币+2 2012-06-08 10:44:49
这个酶非常特别, 需要高的反应温度, 过夜培养。
1.特别要注意DNA的纯度,一定要高。
2. 如果是在质粒上, 应该没啥问题;如果是在PCR产物中, 要看看有没有保护碱基。
3. 需要酶切过夜,用新酶。
4. 因为是高温酶切, 所以建议用个小管做酶切, 比如PCR管,因为如果用1.5ml的EP管做酶切的话, 第二天, 你就会发现盖子上, 有很多结晶水, 而底部的体积都蒸发到顶上去了。 这一点特别重要
7楼2012-06-05 11:12:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 貌似是一篇很有用的文献哈~ 2012-06-05 08:37:16
cqyniu: 金币+10 2012-06-05 09:53:03
SfiI requires two copies of its recognition sequence for cleavage to occur. The two sites can be on either the same or different DNA molecules. Wertzell L.M. et al., (1995) J. Mol. Biol. 248:581-595.
2楼2012-06-04 18:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cqyniu: 金币+5 2012-06-05 08:18:09
1.sfi识别序列长,本身就不是很好切,建议延长酶切时间
2.用常用的酶切载体,看看载体制备有问题没有
3.用sfi切别的质粒(如果有的话),看看酶有问题没有
3楼2012-06-04 20:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cqyniu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jasco at 2012-06-04 20:46:32
1.sfi识别序列长,本身就不是很好切,建议延长酶切时间
2.用常用的酶切载体,看看载体制备有问题没有
3.用sfi切别的质粒(如果有的话),看看酶有问题没有

你说的这几点我都试过了
4楼2012-06-05 08:17:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[基金申请] 言之凿凿,8月21号(明天)放榜 +12 医学老男孩 2026-08-20 14/700 2026-08-20 10:53 by ran2233
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +13 基诺咪客 2026-08-17 17/850 2026-08-20 10:43 by wangyue2015
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 125/6250 2026-08-20 09:02 by 医学老男孩
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见