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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测序正确的质粒用SfiI酶切不动，请问有什么相关文献吗
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cqyniu

金虫 (小有名气)

[求助] 测序正确的质粒用SfiI酶切不动，请问有什么相关文献吗

测序正确的质粒用SfiI酶切不动，请问有什么相关文献吗？或者相关资料
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1楼 2012-06-04 18:10:13
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157382

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cqyniu: 金币+2 2012-06-08 10:44:49
这个酶非常特别， 需要高的反应温度， 过夜培养。
1.特别要注意DNA的纯度，一定要高。
2. 如果是在质粒上， 应该没啥问题；如果是在PCR产物中， 要看看有没有保护碱基。
3. 需要酶切过夜，用新酶。
4. 因为是高温酶切， 所以建议用个小管做酶切， 比如PCR管，因为如果用1.5ml的EP管做酶切的话， 第二天， 你就会发现盖子上， 有很多结晶水， 而底部的体积都蒸发到顶上去了。 这一点特别重要
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7楼2012-06-05 11:12:55
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 貌似是一篇很有用的文献哈~ 2012-06-05 08:37:16
cqyniu: 金币+10 2012-06-05 09:53:03
SfiI requires two copies of its recognition sequence for cleavage to occur. The two sites can be on either the same or different DNA molecules. Wertzell L.M. et al., (1995) J. Mol. Biol. 248:581-595.
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2楼2012-06-04 18:39:02
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jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cqyniu: 金币+5 2012-06-05 08:18:09
1.sfi识别序列长，本身就不是很好切，建议延长酶切时间
2.用常用的酶切载体，看看载体制备有问题没有
3.用sfi切别的质粒（如果有的话），看看酶有问题没有
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3楼2012-06-04 20:46:32
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cqyniu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jasco at 2012-06-04 20:46:32
1.sfi识别序列长，本身就不是很好切，建议延长酶切时间
2.用常用的酶切载体，看看载体制备有问题没有
3.用sfi切别的质粒（如果有的话），看看酶有问题没有

你说的这几点我都试过了
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4楼2012-06-05 08:17:54
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