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蛋白之家

新虫 (小有名气)


[交流] 关于酶切后的连接问题,共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上,就是回收的时候浓度小,但连了好多次都连不上啊  试过4:1 ,3:1的比例,不是说连接的时候3:1的比例是最好的么  为什么连不上啊   很纠结
希望各位大侠前来帮忙,谢谢!
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萝卜丝儿

木虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-30 13:45:51
你说你回收后的浓度低,到底是多少低?还有回收后的片段质量如何?比如A260/280,这个值最好介于1.6-2.0之间,高于2.0是rna污染,低于1.6是蛋白质污染,你片段连接是否是粘性末端或者是平末端,前者效率会比后者高一点,保险起见可以在转化前,把连接酶给灭活,当然一般情况这一步都会跳过,还有片段浓度很低的情况下,连出来就是你的人品了,尽量让你的连接片段浓度高,还有就是,你检查了你的感受态细胞了么?
6楼2012-05-29 22:40:07
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张宏宇123

金虫 (著名写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你回收的片段是多大的啊?
2楼2012-05-29 15:41:22
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gywyl1977

木虫 (正式写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
会有很多可能,先要确保片段和质粒都切开了。然后再考虑连接过程的因素。
3楼2012-05-29 16:03:08
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
试试10:1或以上吧,效果可能会好些
4楼2012-05-29 20:21:33
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