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蛋白之家

新虫 (小有名气)

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[交流] 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上，就是回收的时候浓度小，但连了好多次都连不上啊试过4:1 ，3:1的比例，不是说连接的时候3:1的比例是最好的么为什么连不上啊很纠结
希望各位大侠前来帮忙，谢谢!

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1楼2012-05-29 15:05:57

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萝卜丝儿

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-30 13:45:51

你说你回收后的浓度低，到底是多少低？还有回收后的片段质量如何？比如A260/280,这个值最好介于1.6-2.0之间，高于2.0是rna污染，低于1.6是蛋白质污染，你片段连接是否是粘性末端或者是平末端，前者效率会比后者高一点，保险起见可以在转化前，把连接酶给灭活，当然一般情况这一步都会跳过，还有片段浓度很低的情况下，连出来就是你的人品了，尽量让你的连接片段浓度高，还有就是，你检查了你的感受态细胞了么？