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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步
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蛋白之家

新虫 (小有名气)

[交流] 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上，就是回收的时候浓度小，但连了好多次都连不上啊  试过4:1 ，3:1的比例，不是说连接的时候3:1的比例是最好的么  为什么连不上啊   很纠结
希望各位大侠前来帮忙，谢谢!
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1楼 2012-05-29 15:05:57
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蓝心1728

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试试看
你可以尝试7:1的比例，如目的片段（12ng/ul ）8微升+载体（17.5ng/ul ）0.8微升；11:1的比例，如如目的片段（12ng/ul ）8微升+载体（17.5ng/ul ）0.5微升
也可以自己调整几个浓度，试试。另外你的感受态效率怎么样？一般连接产物转化时，感受态效率至少10的六次方以上，否则不容易筛选的到
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18楼2012-06-03 15:17:54
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张宏宇123

金虫 (著名写手)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你回收的片段是多大的啊？
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2楼2012-05-29 15:41:22
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gywyl1977

木虫 (正式写手)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
会有很多可能，先要确保片段和质粒都切开了。然后再考虑连接过程的因素。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-29 16:03:08
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
试试10:1或以上吧，效果可能会好些
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4楼2012-05-29 20:21:33
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