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蛋白之家

新虫 (小有名气)


[交流] 关于酶切后的连接问题,共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上,就是回收的时候浓度小,但连了好多次都连不上啊  试过4:1 ,3:1的比例,不是说连接的时候3:1的比例是最好的么  为什么连不上啊   很纠结
希望各位大侠前来帮忙,谢谢!
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蛋白之家

新虫 (小有名气)


引用回帖:
16楼: Originally posted by 蓝心1728 at 2012-06-01 14:55:16
1、连接酶本身是否好用,问问其他老师或同学有没有用过同一管的连接酶能否连上,试试其他牌子的酶
2、比列是按质量比,DNA目的片段:载体=7:1~10:1之间,一般目的片段要多一些,例如,7:1的话,取目的片段(44.5ng ...

我酶切之后回收的目的片段的浓度才12ng/ul   载体 一个是43  一个是17.5ng/ul 这样也可以做连接吗?  这是我做的酶切之后回收最好的一次浓度了
17楼2012-06-02 13:28:44
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张宏宇123

金虫 (著名写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你回收的片段是多大的啊?
2楼2012-05-29 15:41:22
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gywyl1977

木虫 (正式写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
会有很多可能,先要确保片段和质粒都切开了。然后再考虑连接过程的因素。
3楼2012-05-29 16:03:08
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
试试10:1或以上吧,效果可能会好些
4楼2012-05-29 20:21:33
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