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蛋白之家

新虫 (小有名气)


[交流] 关于酶切后的连接问题,共同探讨共同进步

各位大侠
为什么酶切切下来也能回收上,就是回收的时候浓度小,但连了好多次都连不上啊  试过4:1 ,3:1的比例,不是说连接的时候3:1的比例是最好的么  为什么连不上啊   很纠结
希望各位大侠前来帮忙,谢谢!
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蛋白之家

新虫 (小有名气)


引用回帖:
11楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-05-30 13:04:10
建议如下: 1)连接体系可以设几个片段的浓度梯度;2)设阳性对照,即转化一个正常的质粒,这是防止你的感受态出问题;3)再不行,检查你的连接酶是否失效等等。

嗯 好的  谢谢
13楼2012-05-30 15:00:20
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查看全部 19 个回答

张宏宇123

金虫 (著名写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你回收的片段是多大的啊?
2楼2012-05-29 15:41:22
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gywyl1977

木虫 (正式写手)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
会有很多可能,先要确保片段和质粒都切开了。然后再考虑连接过程的因素。
3楼2012-05-29 16:03:08
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)



蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
试试10:1或以上吧,效果可能会好些
4楼2012-05-29 20:21:33
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