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番薯素人

新虫 (小有名气)

[求助] 电泳条带呈括号状,中间很暗,这是为什么

各位大虾,昨天本人做的酶切实验,准备做回收,下一步打算连接的。在做大孔胶跑胶之前,我先点了3微升跑的小孔胶,验证酶切已经基本完全,条带比较清楚之后才点了50微升的大孔胶,用光了所有的酶切液。结果50微升的大孔胶除了下面的RNA很亮,中间目的条带呈一个括号状,胶孔边上亮一点,中间很暗很暗,根本没办法回收!请问这是怎么回事啊?难道胶漏了?如果胶漏了,下面的RNA不应该这么亮啊?
今天得重做实验,请教各位大虾,我得找出问题所在才行,否则再功亏一篑就惨了!
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zhanggg709

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-26 10:55:33
做酶切RNA要先除掉,电泳时RNA结合了太多EB了,你看酶切泳道和MARKER泳道的亮度明显不同既是明证。
5楼2012-05-26 08:25:31
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陈朵朵

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-24 13:52:57
你这个marker很明显的话就不存在什么胶漏,而且从来没听说过这个。很多情况下,DNA条带会跑成这个样子,一般认为是DNA降解了,或者DNA量很少。我师兄说就是DNA 降解了 所以才会这样···· 我看还是重做吧
2楼2012-05-24 13:21:14
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qianyr2008

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 有可能啊 2012-05-26 10:55:24
LZ应该是跑的EB胶吧,我感觉是因为下面的RNA太亮了,使得后面的DNA亮度暗,RNA结合了太多的EB
3楼2012-05-24 15:37:47
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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-25 13:45:24
我觉得可能是DNA降解了。另外就是DNA量太少,所以会出现这种现象。建议楼主重做然后直接跑回收胶,不用先电泳了,直接拍个照做切胶回收就可以了
4楼2012-05-25 09:37:28
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