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番薯素人

新虫 (小有名气)

[求助] 电泳条带呈括号状，中间很暗，这是为什么

各位大虾，昨天本人做的酶切实验，准备做回收，下一步打算连接的。在做大孔胶跑胶之前，我先点了3微升跑的小孔胶，验证酶切已经基本完全，条带比较清楚之后才点了50微升的大孔胶，用光了所有的酶切液。结果50微升的大孔胶除了下面的RNA很亮，中间目的条带呈一个括号状，胶孔边上亮一点，中间很暗很暗，根本没办法回收！请问这是怎么回事啊？难道胶漏了？如果胶漏了，下面的RNA不应该这么亮啊？
今天得重做实验，请教各位大虾，我得找出问题所在才行，否则再功亏一篑就惨了！
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1楼 2012-05-24 11:03:47
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陈朵朵

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-24 13:52:57
你这个marker很明显的话就不存在什么胶漏，而且从来没听说过这个。很多情况下，DNA条带会跑成这个样子，一般认为是DNA降解了，或者DNA量很少。我师兄说就是DNA 降解了 所以才会这样···· 我看还是重做吧
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2楼2012-05-24 13:21:14
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qianyr2008

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 有可能啊 2012-05-26 10:55:24
LZ应该是跑的EB胶吧，我感觉是因为下面的RNA太亮了，使得后面的DNA亮度暗，RNA结合了太多的EB
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3楼2012-05-24 15:37:47
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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-25 13:45:24
我觉得可能是DNA降解了。另外就是DNA量太少，所以会出现这种现象。建议楼主重做然后直接跑回收胶，不用先电泳了，直接拍个照做切胶回收就可以了
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4楼2012-05-25 09:37:28
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zhanggg709

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-26 10:55:33
做酶切RNA要先除掉，电泳时RNA结合了太多EB了，你看酶切泳道和MARKER泳道的亮度明显不同既是明证。
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5楼2012-05-26 08:25:31
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