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早冰124

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选只长白斑

蓝白斑筛选,pUC19检测感受态细胞是转化效率很高,蓝白斑筛选后均为蓝斑,但为何连接产物转化后全是白斑,一个蓝斑都没有,并且菌落PCR检测所有的白色菌落均批不出目的条带,这是什么原因,更奇怪的是BL21做感受态细胞时只出现蓝斑,TOP10做感受态细胞时全是白斑,求解,非常感谢啊!
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xmuring

木虫 (著名写手)


从lz描述的情况分析应该是克隆米有做成,我的建议是,能否调整下vector和insert DNA的相对摩尔数,重新做克隆。话说你的目的基因好大啊,我也没做过那么大的。。。
7楼2012-05-21 15:04:32
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damaomao

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2012-05-20 10:37:49
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xmuring

木虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-20 18:41:45
早冰124: 金币+1, 有帮助 2012-05-21 14:51:18
BL21的lacZ基因在基因组上,在IPTG/Xgal平板上本身就是形成蓝色菌落,而TOP10则是通过质粒和基因组的lac基因片段之间α互补才会产生蓝斑。会不会是克隆没做好,连接失败了?lz是否重复过克隆过程?还有就是抗生素会不会有问题。。。另外,菌落PCR用的引物是M13通用引物还是自己设计的?建议lz说的详细点~~~~一不小心就写了这么多,lz多包涵下
3楼2012-05-20 17:01:20
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早冰124

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by damaomao at 2012-05-20 10:37:49:
我建议重新要宿主菌  有可能宿主菌出问题了

BL21和Top10都是新买来的,经pUC19转化检测发现转化效率很好,怒视菌的问题
4楼2012-05-21 14:35:49
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