24小时热门版块排行榜    

查看: 4018  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

早冰124

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选只长白斑

蓝白斑筛选,pUC19检测感受态细胞是转化效率很高,蓝白斑筛选后均为蓝斑,但为何连接产物转化后全是白斑,一个蓝斑都没有,并且菌落PCR检测所有的白色菌落均批不出目的条带,这是什么原因,更奇怪的是BL21做感受态细胞时只出现蓝斑,TOP10做感受态细胞时全是白斑,求解,非常感谢啊!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

早冰124

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xmuring at 2012-05-20 17:01:20:
BL21的lacZ基因在基因组上,在IPTG/Xgal平板上本身就是形成蓝色菌落,而TOP10则是通过质粒和基因组的lac基因片段之间α互补才会产生蓝斑。会不会是克隆没做好,连接失败了?lz是否重复过克隆过程?还有就是抗生素会

连接转化次数已经做了10次了,起初发现是菌体的问题,后来菌体全换新的了,我用的载体是pGEX-4T1,大约5Kb,经BamHI和SalI双酶切处理,目的片段3Kb,重组质粒大约8Kb,转化BL21(DE3)发现只长蓝斑且菌体较少,转化top10后全为白斑,菌体较多些。但是无论是白斑和蓝斑均做过colony PCR,没有批出目的条带,同时挑选部分菌落培养提取质粒,最终发现质粒在5~6Kb之间,但是连接转化之前有做过l连接产物电泳检测,发现有时在7、8或10Kb之间都出现过条带,但是菌却长得很奇怪,如果说是氨苄问题那也不能解释这个原因啊
5楼2012-05-21 14:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

damaomao

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2012-05-20 10:37:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmuring

木虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-20 18:41:45
早冰124: 金币+1, 有帮助 2012-05-21 14:51:18
BL21的lacZ基因在基因组上,在IPTG/Xgal平板上本身就是形成蓝色菌落,而TOP10则是通过质粒和基因组的lac基因片段之间α互补才会产生蓝斑。会不会是克隆没做好,连接失败了?lz是否重复过克隆过程?还有就是抗生素会不会有问题。。。另外,菌落PCR用的引物是M13通用引物还是自己设计的?建议lz说的详细点~~~~一不小心就写了这么多,lz多包涵下
3楼2012-05-20 17:01:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

早冰124

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by damaomao at 2012-05-20 10:37:49:
我建议重新要宿主菌  有可能宿主菌出问题了

BL21和Top10都是新买来的,经pUC19转化检测发现转化效率很好,怒视菌的问题
4楼2012-05-21 14:35:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-02 10:25 by iaeyuan
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +17 晴天加油 2026-08-26 19/950 2026-09-02 10:07 by 奶奶的心意
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +3 瞬息宇宙 2026-09-01 5/250 2026-09-02 08:01 by anjeeshine
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
信息提示
请填处理意见