| 查看: 5783 | 回复: 16 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？
|
|||
| 本人做目的基因和PMD18-T连接，挑菌、摇菌后，对目的基因做菌液PCR筛选阳性菌株时没条带，但是我对摇出来的菌液提取质粒，然后对质粒进行目的基因PCR时跑出目的条带了，奇怪了，我前面有一次对菌液进行PCR时能跑出来，菌液PCR感觉时灵时不灵，我的PCR体系：ddH2O:14.25,BUFFER:2.5,DNTP:1,引物1:1，引物2:1，菌液：5，Taq:0.25,总共是25微升体系，哪位大侠指点下小弟呢。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 科研资源 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
bailihu01» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有109人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液pcr有带，扩大培养摇不起来
已经有11人回复
- 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
已经有18人回复
- PCR扩增法制备低拷贝质粒（替代常规质粒提取）
已经有11人回复
- 菌落PCR无条带
已经有19人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 菌液PCR验证又失败了
已经有15人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 农杆菌菌液PCR没有结果
已经有10人回复
- 【求助/交流】菌液PCR结束，肉眼直接看到条带可能不？
已经有15人回复
- 【求助/交流】有关菌液PCR的问题
已经有14人回复
8楼2012-05-20 22:55:04
动力泉
金虫 (正式写手)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 4851.8
- 红花: 4
- 帖子: 502
- 在线: 266.5小时
- 虫号: 1251211
- 注册: 2011-03-31
- 性别: GG
- 专业: 植物学
2楼2012-05-18 18:59:58
3楼2012-05-18 22:28:42
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
一度冰火: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-18 23:26:13
感谢参与，应助指数 +1
一度冰火: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-18 23:26:13
|
嗯............. 为什么要纠结在菌液PCR的成功率上呢 质粒PCR成功就已经是可以证明插入正确的了 个人觉得菌液PCR只是鉴定步骤 还要溶壁酶来处理后才做PCR是不是有些小题大做了呢？ 个人做法流程 一边保菌一边鉴定 像这种TA Clone 做10~20个鉴定/plate 试片段大小再调整鉴定数量 若没有阳性 再次做挑菌鉴定 还是一边保菌一边鉴定 直到把菌挑完60%左右 若你还没有阳性 就挑前边保菌摇大后提10个左右质粒 再PCR 若还没有 那就重新亚克隆吧.................. 说实话 从来没有考虑过因为菌的原因扩不出来 大肠和农杆的我都木有碰到这种情况 |
4楼2012-05-18 22:41:52
